人胸腺素β4二串体蛋白的制备方法

摘要

本发明属于医药生物技术领域，具体涉及一种人胸腺素β4二串体蛋白质的制备方法。通过该制备方法可获得纯度达98％以上的目的蛋白质，所获得的人胸腺素β4二串体蛋白质具有生物学活性；通过增殖实验、迁移实验测定该蛋白质活性，结果表明，人胸腺素β4二串体蛋白质可促进细胞的增殖与迁移，其活性优于化学合成单体；且该方法仅使用一个层析柱就完成了目的蛋白的分离纯化，步骤简单、快速、成本低，为人胸腺素β4的进一步研究和广泛应用奠定基础。

主权项

一种重组人胸腺素β4二串体蛋白质的制备方法，其特征在于，该制备方法包含以下步骤：1）诱导培养含有重组人胸腺素β4二串体蛋白质的工程菌BL21/pET‑22b(+)‑Tβ4②，诱导剂为0.01 mM的IPTG，离心获得菌体；2）按1 g菌体加10 ml STE裂菌缓冲液的比例将菌体重悬, 所述STE裂菌缓冲液由100 mM NaCl、1 mM EDTA、pH 8.0的20 mM Tris‑HCl组成；在冰浴中超声裂解菌体，功率300 W，工作时间5 s，间歇时间10 s，全程时间30 min，4℃下以12000 rpm的速度离心20 min，收集上清；3）将步骤2）得到的上清，常温溶解在含饱和度分别为40%、50%、60%硫酸铵的20 mM Tris‑HCl缓冲液中，之后再缓慢搅拌30 min，4℃下以12000 rpm的速度离心20 min；4）收集离心后上清进行电泳后，选择饱和度为50%的硫酸铵缓冲液，用0.45μm滤膜过滤后，将其用A液：20 mM Tris‑HCl pH 7.5，50% (NH4)2SO4充分平衡后的Phenyl Sepharose 6 Fast Flow low sub 层析柱纯化，用B液：20 mM Tris‑HCl pH 7.5，负盐梯度洗脱10个柱床体积，收集目的蛋白所在洗脱峰进行分析，最终获得纯度达98%以上的目的蛋白质。