一种坎利酮高效转化生产11α-羟基坎利酮的方法

摘要

一种坎利酮高效转化的微生物方法属于微生物制备技术，涉及一种以赭曲霉为菌种，采取高密度培养实现高效转化生产11α-羟基坎利酮的方法。解决了现有的坎利酮微生物转化技术中存在生产周期长，成本高，转化率低等问题。本发明采用高密度培养提高单位体积培养液中菌体的浓度，并使其稳定在较高浓度，保证高转化率的同时，缩短了转化时间，大大降低了生产成本，为工业化生产奠定了基础，具有重要的意义。

主权项

一种坎利酮高效转化生产11α‑羟基坎利酮的方法，其特征在于以赭曲霉(Aspergillus ochraceus，TCCC41060)为生产菌株，经过产孢和生产斜面制备、孢子悬液制备、种子培养、发酵培养、流加葡萄糖高密度培养转化底物坎利酮得到产物11α‑羟基坎利酮，具体步骤如下：(1)产孢和生产斜面制备生产菌株为赭曲霉TCCC41060，将该菌置于PDA培养基上，25～30℃恒温培养3～6d生成黄色孢子，然后转接到酵母膏大豆蛋白胨葡萄糖培养基斜面上，25～30℃培养5～8d，生成金黄色孢子，即得生产斜面，于4℃冰箱保藏，保藏时间在15d以内；(2)孢子悬液制备将10ml质量体积比20％吐温80溶液加入生产斜面中，洗下孢子，计数调整孢子悬浮浓度在4×108～8×108个/100ml；(3)种子培养每100ml种子培养基接入1ml孢子悬液，在摇床温度25～30℃，转速180～200r/min培养18～24h即得种子培养液；(4)发酵培养将步骤(3)所述种子培养液按8％的接种量接入到发酵培养基中，发酵初始转速150r/min，通气量70～100L/h，罐压0.02Mp，培养温度25～30℃，通过调节发酵罐转速和通气量控制发酵液溶氧在30％以上，培养18～22h，残糖降至10～14g/L时，进行坎利酮底物投料，投料量15～20g/L；(5)流加葡萄糖高密度培养进行底物转化发酵28～32h，培养基中的葡萄糖基本耗尽时，开始以100mL/h的流速流加1L 10g/L的葡萄糖溶液；取发酵液用高效液相色谱仪进行检测，当坎利酮转化率大于90％时，结束发酵。