利用秀丽隐杆线虫休眠作为生物标志物甄别地沟油的方法

摘要

利用秀丽隐杆线虫休眠作为生物标志物甄别地沟油的方法，它涉及一种地沟油甄别方法。本发明目的要解决现有地沟油鉴定方法存在灵敏度低、精确度差、操作复杂、成本高的问题。方法，一、采用NaCl、琼脂粉、蛋白胨、CaCl2水溶液、MgSO4水溶液、磷酸盐缓冲液和蒸馏水混合均匀得到培养液，然后灭菌处理，最用经干燥处理即得到培养基；二、先向步骤一制备的培养基中涂入大肠杆菌OP50菌液，并培养一定时间，再将接入秀丽隐杆线虫幼虫进行培养46h。优点：一、实现对特异成分痕量低的高精炼地沟油可以有效鉴定；二、操作方便，成本低廉，易于培训和掌握。本发明主要用于甄别地沟油。

主权项

利用秀丽隐杆线虫休眠作为生物标志物甄别地沟油的方法，其特征在于利用秀丽隐杆线虫休眠作为生物标志物甄别地沟油的方法是按以下步骤完成： 一、制备培养基：采用NaCl、琼脂粉、蛋白胨、0.8mol/L～1.2mol/L的CaCl2水溶液、0.8mol/L～1.2mol/L的MgSO4水溶液、磷酸盐缓冲液和蒸馏水混合均匀得到培养液，密封后置于高压蒸汽灭菌锅中，并在120℃下灭菌处理15min～25min，然后降温至50℃～60℃，并在无菌环境下加入待检测食用油，再转移至培养皿中，最后在温度为20℃的无菌环境下干燥8h～12h，即得到培养基；二、培养：向步骤一制备的培养基中均匀涂入浓度为1×109个/mL～2×109个/mL大肠杆菌OP50菌液，然后37℃培养8h～12h，再接入秀丽隐杆线虫幼虫进行培养46h，在培养24h时秀丽隐杆线虫幼虫发育为秀丽隐杆线虫成虫并产卵；继续培养12h时产卵发育成第二代秀丽隐杆线虫幼虫；再继续培养10h，若第二代秀丽隐杆线虫幼虫进入休眠状态，则待检测食用油不是地沟油；若第二代秀丽隐杆线虫幼虫不进入休眠状态，与正常培养基生长的秀丽隐杆线虫子代无明显差别，则待检测食用油是地沟油；步骤一中所述的培养液中NaCl的浓度为2×10‑3g/mL～3×10‑3g/mL，琼脂粉的浓度为15×10‑3g/mL～20×10‑3g/mL，蛋白胨的浓度为2×10‑3g/mL～3×10‑3g/mL，CaCl2的浓度为0.8×10‑6g/mL～1×10‑6g/mL，MgSO4的浓度为0.8×10‑6g/mL～1×10‑6g/mL；步骤一中所述的培养液中加入的磷酸盐缓冲液占培养液总体积的20‰～25‰；步骤一中所述加入的待检测食用油与培养液的体积比为(1～10):1000；步骤二中所述浓度为1×109个/mL～2×109个/mL大肠杆菌OP50菌液的涂入量为2mL/cm2～3mL/cm2；步骤二中所述的秀丽隐杆线虫幼虫的接种量为5只/cm2～10只/cm2。