可用于尿酸仪检测目标基因的黄嘌呤氧化酶-DNA复合物及其制备方法和在检测中的应用

摘要

本发明公开了一种黄嘌呤氧化酶-DNA复合物，其分子一端为黄嘌呤氧化酶，另一端为辅助探针，二者是通过sulfo-SMCC作为原料反应后生成的连接臂进行连接，连接臂包括4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷基团。该复合物的制备方法是先将辅助探针、缓冲液等混合、孵育，然后将黄嘌呤氧化酶与sulfo-SMCC振荡混合反应，最后将得到的辅助探针溶液和黄嘌呤氧化酶溶液混合。本发明的复合物可通过尿酸仪来检测目标DNA，其方法是取金膜预处理后加入捕获探针构建传感器；再加入待测目标溶液杂交后洗涤，加入复合物溶液杂交后洗涤；最后加入黄嘌呤，并用尿酸仪对反应产物进行检测。本发明的优点体现在操作方便、灵敏度高且选择性高。

主权项

一种可用于尿酸仪检测目标基因的黄嘌呤氧化酶‑DNA复合物，其特征在于：所述黄嘌呤氧化酶‑DNA复合物为长链式分子结构，所述黄嘌呤氧化酶‑DNA复合物的分子一端为黄嘌呤氧化酶，所述黄嘌呤氧化酶‑DNA复合物的分子另一端为可杂交于待检测目标基因上的辅助探针，所述黄嘌呤氧化酶和辅助探针之间是通过4‑(N‑马来酰亚胺甲基)环己烷‑1‑羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐作为原料反应后生成的连接臂进行连接，所述连接臂包括4‑(N‑马来酰亚胺甲基)环己烷基团；所述黄嘌呤氧化酶上含有氨基，所述辅助探针上修饰有巯基，所述4‑(N‑马来酰亚胺甲基)环己烷基团的脂肪环1号位上通过羰基与所述黄嘌呤氧化酶上的氨基相连，所述辅助探针通过其上修饰的巯基连接至所述4‑(N‑马来酰亚胺甲基)环己烷基团的五元杂环的3号位上。