一种利用高效液相离子交换色谱测定低聚木糖的方法

摘要

本发明公开了一种利用高效液相离子交换色谱测定低聚木糖的方法。该方法包括：高效液相离子交换色谱系统与色谱条件的确定、低聚木糖标准工作方程的测定、木七糖和木八糖的色谱保留时间确定和低聚木糖成分的分析与测定。本发明的利用高效液相离子交换色谱测定低聚木糖的方法，首次建立了高效液相离子交换色谱精确定量测定低聚木糖的方法，采用CarboPacTM PA200（3×250m）色谱柱，通过醋酸钠和氢氧化钠二元梯度洗脱显著提高了木糖及各种低聚木糖组分之间的分离度及检测效率，实现对低聚木糖样品，尤其是木二糖至木六糖组分的精确定量测定，及对木七糖和木八糖类糖组分的定性分析，对于低聚木糖产品的检测评价和推广应用具有重要的意义。

主权项

一种利用高效液相离子交换色谱测定低聚木糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）高效液相离子交换色谱系统与色谱条件：美国Dionex ICS‑3000 离子色谱系统，采用CarboPacTM PA200 3×250m色谱柱带保护柱3×50mm，柱温30℃，自动上样，进样体积10.0μL；以500mmol/L醋酸钠和100mmol/L氢氧化钠为淋洗液进行二元梯度淋洗，流速为0.3mL/min，在0～40min内醋酸钠溶液淋洗的浓度梯度为0～120mmol/L；电化学检测器检测模式为金工作电极和pH‑Ag/AgCl复合型参比电极，采用积分脉冲安培检测法和色谱峰面积积分法测定糖组分的含量；（2）低聚木糖标准工作方程的测定：将木糖、木二糖、木三糖、木四糖、木五糖和木六糖标准品配制成0.5～10 mg/L的标准溶液，采用步骤（1）中的色谱条件测定木糖至木六糖的标准工作方程和RT；（3）木七糖和木八糖的色谱保留时间的确定：以木糖至木六糖的聚合度NDP与步骤（2）测定的保留时间RT，进行线性回归计算出保留时间RT与聚合度NDP之间的线性关系式为：保留时间RT（min）=2.5785×聚合度NDP+1.9726，相关系数R2=0.9952；由该线性关系式计算出木七糖和木八糖的色谱保留时间； （4）低聚木糖成分的分析与测定：将低聚木糖待测样品充分溶解于25～30℃的蒸馏水中，定容并调节待测低聚木糖组分的浓度1.0～8.0mg/L，在10000rpm条件下离心5min后以0.2μm微滤膜过滤上清液得样品液，采用步骤（1）中的色谱条件进行色谱检测；采用步骤（2）和（3）进行木二糖至木六糖的定量测定，及木七糖和木八糖的定性分析。