在流式芯片检定中对核酸目标的实时扩增和微阵列检测

摘要

本发明的方法涉及一种通过生物样品在循环的流式芯片溶液中流经扩增所需的不同温度进行扩增以及在特异捕捉分子的微阵列上对其进行实时检测，从而在可能的其他化合物中对存在于生物样品中的至少一种多核苷酸目标化合物进行识别和/或定量的方法。

主权项

一种对存在于样品中的目标多核苷酸分子进行实时扩增和检测的方法，包括以下步骤：a）提供流式芯片装置，包括：‑流动通道，其截面在0.01～10mm2之间且容积为V1，其中所述流动通道被配置成使得引入所述流动通道中的溶液经由所述流动通道而循环；‑检测室，其与所述流动通道流体连通，所述检测室具有光学透明的固体支持物以及包括多于4种固定在所述透明固体支持物的表面的局部区域中的捕捉分子的微阵列，其中所述检测室的高度低于1mm且容积为V2，且其中V2/V1比率在0.001与0.5之间；‑至少2个、优选3个温度被调控的不同温度区，各个温度区位于所述流动通道的不同位置，其中一个温度区包括所述检测室并且具有使所述目标多核苷酸分子杂交到所述捕捉分子的温度；b）将体积为V3且含有目标多核苷酸分子的溶液引入到所述流动通道和用于多核苷酸分子扩增的试剂中，其中V3/（V1+V2）比率高于0.02且低于1；c）将所述溶液进行至少5个扩增循环，以获得标记的目标多核苷酸分子，其中通过使所述溶液经所述流动通道和相同的检测室在不同温度区之间循环，从而得到一个扩增循环，其中一个扩增循环进行少于3分钟；d）通过检测从具有杂交的目标多核苷酸的表面的局部区域发出且在通过光束使荧光染料激发之后测量到的荧光，从而在至少3个、优选为至少5个不同的扩增循环中从杂交的目标多核苷酸分子测量不同扩增时点的荧光信号；e）分析从所述局部区域得到的信号值，以对存在于所述样品中的目标多核苷酸分子进行检测和/或定量。