用于检测J亚群禽白血病病毒的斑点杂交方法

摘要

本发明涉及一种用于检测J亚群禽白血病病毒的斑点杂交方法。所述的核酸探针是基于J亚群禽白血病病毒囊膜env特异性基因序列，长度为248bp，位置在hprs-103原型毒株的第6736bp-6983bp之间，通过合成该目的基因，大量克隆；标记制备ALV-J的核酸探针；提取接毒细胞DNA，用斑点杂交的方法进行检测，在尼龙膜固定DNA，预杂交和杂交，洗膜，显色检测斑点杂交反应阳性。通过摸索ALV-J核酸探针与DNA反应最佳反应温度为50℃，探针反应浓度25ng/ml，确定用于检测ALV-J的斑点杂交方法，斑点杂交的结果表明该核酸探针能有效地检测出ALV-J，对禽白血病各亚群、马立克氏病、网状内皮增生症有效地进行鉴别诊断，并且该核酸探针的检测快捷准确，因此本发明为J亚群禽白血病的诊断提供了新的思路和方法。

主权项

一种用于检测J亚群禽白血病病毒的核酸探针，其特征在于：其具体制备步骤如下：通过比较国内外各J亚群禽白血病病毒代表毒株env基因同源性，从gp37基因设计出高度保守长度248bp目的基因片段，其基因序列如Seq ID No:1所示，用以作为制备核酸探针的基序，位置在Hprs‑103原型病毒基因序列第6736‑6983bp，合成该目的基因，进行大量克隆；向离心管中加1μg上述克隆获得的DNA模板、高压灭菌的双蒸水至最终体积为16μl;沸水水浴10min变性DNA,迅速放入冰水中冷却2min;加4μl地高辛引物混合至离心管中并简单离心；在37℃温箱内孵化20h以上；65℃加热10min终止反应。