一种利用UPLC/MS/MS快速测定黑花生种皮中花色苷的方法

摘要

本发明公开了一种利用UPLC/MS/MS快速测定黑花生种皮中花色苷的方法，属于检测技术领域。包括以下步骤：（1）黑花生种皮中花色苷的提取；（2）黑花生种皮中花色苷的净化；（3）黑花生种皮中花色苷的分析测定。本发明可以更快速、更充分的提取黑花生中的花色苷，以更准确地测出不同花色苷的种类和含量，对于揭示其活性功能的物质基础和作用机制具有重要意义，同时为开发富含花色苷的花生品种，提高花生的营养品质和保健功能提供理论依据。

主权项

1.一种利用UPLC/MS/MS快速测定黑花生种皮中花色苷的方法，其特征是，包括以下步骤：（1）黑花生种皮中花色苷的提取称取0.20g黑花生种皮试样于50mL具塞塑料离心管中，加入10mL90Vol%甲醇水溶液，涡旋震荡1min，超声提取15min，在4000rmp转速下离心5min，将上清液过滤至150mL烧瓶；依此方法再重复提取2次，每次提取时均加入10mL90Vol%甲醇水溶液，最后合并3次提取的上清液；所述90Vol%甲醇水溶液中含0.5Vol%甲酸，pH=2.5；将合并后的上清液在40℃条件下减压浓缩，然后在40℃水浴条件下氮吹浓缩，除去甲醇，再加入5mL0.1Vol%甲酸酸化水，涡旋震荡2min，即得样品溶液；（2）黑花生种皮中花色苷的净化将SPEC₁₈柱依次用0.1Vol%甲酸酸化甲醇5mL和0.1Vol%甲酸酸化水5mL活化，注入步骤（1）中样品溶液，SPEC₁₈柱吸附花色苷，然后用0.1Vol%甲酸酸化水10mL淋洗柱，最后用0.1Vol%甲酸酸化甲醇5mL洗脱花色苷，在40℃水浴条件下氮气吹干；用0.1Vol%甲酸酸化水定容至2mL，经0.22μm滤膜过滤，即得待测溶液；（3）黑花生种皮中花色苷的分析测定①实验条件的确定色谱条件：色谱柱：MSC₁₈色谱柱，色谱柱的尺寸为：2.1mm×150mm I.D.,3.5μm，柱温40℃；流动相A：6Vol%甲酸水溶液，流动相B：乙腈，梯度洗脱；流速：0.5mL/min；洗脱方式：梯度洗脱；进样量：10μL；记录时间：20min；质谱条件：离子化模式：大气压电喷雾离子源，正离子模式；离子源温度：120℃；脱溶剂气温度：450℃；锥孔气流量：60L/h；脱溶剂气流量600L/h；毛细管电压1.5kV；锥孔电压45V；②按照①中实验条件，注入步骤（1）中所述待测溶液，进行分析测定，采用全扫描、母离子扫描、子离子扫描、多反应监测模式确定花色苷种类与含量。