一种重组人血白蛋白—干扰素α2b的生产方法

摘要

本发明涉及在毕赤酵母系统中分泌表达的重组人血白蛋白-干扰素α2b的生产方法。尤其涉及重组人血白蛋白-干扰素α2b在毕赤酵母中的高效表达以及表达产物的纯化。该发明将含有重组人血白蛋白-干扰素α2b的毕赤酵母工程菌高密度发酵，随后将发酵液通过高速离心机离心收集发酵上清，阳离子交换层析，疏水层析和分子筛层析进行组合纯化生产，生产出符合药典规定的重组人血白蛋白-干扰素α2b融合蛋白。本发明发酵表达量高，纯化工艺组合合理，操作程序简化，收率高，生产成本低，符合产业化要求。

主权项

一种重组人血白蛋白‑干扰素α2b的生产方法，通过构建人血清白蛋白‑干扰素α2b融合蛋白基因的毕赤酵母工程菌株，发酵表达后再进行纯化，其特征在于，工程菌株的构建是将人血白蛋白cDNA的C端与IFN cDNA的N端融合，与酵母表达表达载体pPICZα连接后引入毕赤酵母X33表达，成为重组人血白蛋白‑干扰素α2b的工程菌株；发酵表达后的纯化是通过将离心收集发酵上清液，后依次通过阳离子交换层析，疏水层析和分子筛层析得到重组人血清白蛋白‑干扰素α2b；所述阳离子交换层析，需要用冰醋酸调节，使pH为4.6，再用蒸馏水将发酵液稀释使电导率为≤20mS/cm，将发酵上清直接上样capto MMC柱；所述疏水层析步骤中，在阳离子目标蛋白收集液中加入Na2SO4，使Na2SO4的终浓度达到0.7M，直接上样Phenyl Sepharose High Performance柱，收集目的蛋白峰；所述分子筛层析步骤中，将疏水层析收集目的蛋白峰过Superdex 200prep grand分子筛层析柱，用20mM的磷酸盐缓冲液洗脱，收集目的蛋白峰，得到重组人血清白蛋白‑干扰素α2b。