一种基于Ipr1基因构建的巨噬细胞异性打靶载体和重组细胞

摘要

本发明公开了一种基于Ipr1基因构建的巨噬细胞异性打靶载体和重组细胞，通过在Ipr1基因5′端连接MSR1启动子使Ipr1基因在牛的巨噬细胞中特异的高效表达；并进一步构建重组基因LA-MSR1-Ipr1-SA，使目的基因定点整合在牛28号染色体SP-A与MAT1A基因之间。构建了Ipr1巨噬细胞特异性打靶载体pLMIS，将其转染到新生牛耳成纤维细胞，通过G418和GCV正负筛选，构建转基因的新生牛耳成纤维细胞系，作为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚；胚胎移植后，生产出定点插入Ipr1基因的转基因牛5头，其中4头存活，转基因牛对M.bovis有抗性。

主权项

一种重组Ipr1基因，其特征在于，在Ipr1基因的上游连接牛巨噬细胞特异性启动子MSR1，构成重组基因MSR1‑Ipr1；Ipr1基因的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示，MSR1的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.2所示；在MSR1的上游连接如SEQ.ID.NO.3所示的同源臂LA，在Ipr1的下游连接如SEQ.ID.NO.4所示的同源臂SA，构成重组基因LA‑MSR1‑Ipr1‑SA。