测定药物最低抑菌浓度的方法

摘要

本发明公开一种能够快速、简便、定量检测最低抑菌浓度的方法，包括以下步骤：按照CLSI标准(2010版)将一定浓度的新鲜肠球菌悬液，加入到含有浓度梯度抗菌药物的无菌96孔板孵育；4h孵育结束后，向各孔加入一定量的荧光染料SYTOX Green和DAPI，室温避光15min，利用荧光酶标仪分别读取各孔两种染料的荧光强度，记为FSYTOX Green和FDAPI；扣除相应本底荧光后，绘制细菌荧光强度比(Pdead/livel)与药物浓度(CDrug)的对应曲线，当Pdead/live不再波动时所对应的最低药物浓度(CDrug)即为该抗生素对该细菌的MIC。[Pdead/live＝FSYTOX Green/FDAPI]。本发明的检测方法具有简便、快速、客观，能对所测数据直接进行数学统计与分析等特点，为测定抗菌药物的最低抑菌浓度提供了新的检测方法，具有广阔的应用前景。

主权项

一种测定药物最低抑菌浓度的方法，其特征在于，所述方法步骤如下：（1）制备终浓度为2.5×106CFU/ml～5×106CFU/ml的菌悬液；（2）分别制备不同浓度梯度的药物工作液，浓度范围包括512、256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125μg/ml；（3）将菌悬液分别加入到上述浓度梯度的药物工作液中，混匀，35℃±0.5℃，孵育4～6h；（4）向菌悬液与药物工作液混合液中加入染料SYTOX Green和DAPI的混合液，终浓度分别为1.5μM和300nM，室温避光作用15min；（5）荧光酶标仪下，分别读取各孔SYTOX Green和DAPI两种染料的荧光强度值；（6）绘制荧光强度比与各药物浓度之间对应曲线图；所述荧光强度比为SYTOX Green荧光强度值与DAPI荧光强度值比；所述的荧光强度比与各药物浓度之间对应曲线图，在曲线图中最高点后的第一个拐点所对应的药物工作液浓度即为该药物对该菌的最低抑菌浓度。