一种甘蔗液体浅层培养方法

摘要

本发明涉及一种甘蔗液体浅层培养方法，包括抑菌剂的配制、培养容器消毒、培养基配制、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽。采用本发明的甘蔗液体浅层培养方法，培养基无需高压灭菌，简化了培养基的配制环节；本发明的培养基中省去了琼脂粉，并且提高增殖率29.2%以上，每丛壮苗数提高53.9%以上，可以降低组培成本25%以上；而且，粗壮的瓶苗有利于瓶苗移栽。本发明具有操作简单，投资少，实用性强，推广性好的特点，适合在甘蔗组培工厂化育苗中推广。

主权项

一种甘蔗液体浅层培养方法，包括抑菌剂的配制、培养容器消毒、培养基配制、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：　　（1）抑菌剂的配制：使用益培隆杀菌剂配制抑菌剂1号和抑菌剂2号；抑菌剂1号的配制方法：在益培隆杀菌剂A瓶药剂中加入20 ml蒸馏水稀释后与B瓶药剂混合，并用蒸馏水定容到100 ml，即为抑菌剂1号；抑菌剂2号的配制方法：在益培隆杀菌剂A瓶药剂中加入20 ml蒸馏水稀释后与B瓶药剂混合，加入1g头孢霉素，并用蒸馏水定容到100 ml，即为抑菌剂2号；　　（2）培养容器消毒：将培养瓶及瓶盖在抑菌剂1号与水的体积比为0.3 %～0.5 %的水溶液中浸泡不少于10 h，保存备用； 　 （3）培养基配制：诱导培养基为；MS＋2.0 mg/L 6‑BA ＋0.5～2.0 mg/L KT +5 ml/L抑菌剂2号＋30 g/L蔗糖，pH5.8；增殖培养基为MS+0.5～1 mg/L 6‑BA+0.5～1 mg/L KT+3～5 ml/L抑菌剂2号+30.0 g/L蔗糖，pH5.8；生根培养基为1/2MS+1～3 mg/L NAA +3ml/L抑菌剂2号＋30 g/L蔗糖；所述MS培养基为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述6‑BA，指6‑苄氨基嘌吟；所述KT，指6‑糠氨基嘌吟；所述NAA，指〆‑萘乙酸；配制培养基时，先不加抑菌剂2号，按各培养基配方配齐其他原料后，定容、煮开，当温度冷却至50℃时，再按各培养基配方添加抑菌剂2号，用1 mol/L的NaOH或1 mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到培养容器中，封口，冷却后备用；　　（4）诱导培养：取健壮的甘蔗植株，从最高肥厚带往下30 cm处切下，用75%（Ｖ/Ｖ）的酒精表面消毒；剥离外层叶鞘，取含生长点0.5～1cm长的茎尖，接种到诱导培养基上；诱导培养基的液面与培养瓶底面的距离为0.3～0.5cm，15天转接一次；培养室温度为25～28 ℃，光照12h，光照强度为1200 ～1500 lx；　　（5）增殖培养：取0.2 cm2诱导培养的丛生芽，接种到增殖培养基上，增殖培养基的液面与培养瓶底面的距离为0.8～1cm，15天转接一次；培养室温度为25～28 ℃，光照12h，光照强度为1200 ～ 1500 lx；　  （6）生根培养：将苗高不低于2.0cm、且茎粗不小于0.2cm的增殖苗，转入生根培养基上，生根培养基的液面与培养瓶底面的距离为0.8～1cm，20～30天移栽；培养室温度为25～28 ℃，光照12h，光照强度为1200 ～1500 lx；　　（7）瓶苗移栽：将生根苗取出后，洗净根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡30min后移栽至穴盘，放到大棚内；移栽的基质为河沙，种植后浇透水，大棚上层用50%以上的遮光网遮盖，移栽的环境温度为20～32℃。