表达61家族糖苷水解酶基因的毕赤酵母工程菌株

摘要

本发明是一种表达嗜热子囊菌光孢变种Thermoascus aurantiacus var.levisporus热稳定热稳定61家族糖苷水解酶基因61f的毕赤酵母工程菌Pichiapastoris GS-TA-61。通过RT-PCR及RACE方法从嗜热子囊菌光孢变种Thermoascus aurantiacus var.levisporus获得糖苷水解酶基因61f，将其克隆并插入到毕赤酵母整合表达载体pPIC9K中，然后将得到的糖苷水解酶基因61f表达载体pPIC9K/61f导入到毕赤酵母GS115中，再从中筛选出一种表达糖苷水解酶基因61f的酵母工程菌GS-TA-61。该工程菌表达的糖苷水解酶61F对内切纤维素酶的活性具有明显的促进作用，混合酶比原始内切酶N24的降解纤维素的活性提高3.89倍。不同金属离子对61F和61F+N24混合酶活性具有促进或抑制作用。61F具有良好的热稳定性和提高纤维素酶活力的能力，可广泛用于纤维废料及其它工业领域，具有重大经济价值和社会价值。

主权项

一种表达嗜热子囊菌光孢变种Thermoascus aurantiacus var.levisporus 61家族糖苷水解酶61f基因的酵母工程菌株，其特征在于该菌为一种毕赤酵母，通过RT‑PCR及RACE方法从嗜热子囊菌光孢变种Thermoascus aurantiacus var.levisporus获得热稳定61家族糖苷水解酶基因61f，将该基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K,获得表达重组质粒pPIC9K/61f,转化毕赤酵母GS115,从中筛选出表达热稳定糖苷水解酶基因61f的毕赤酵母工程菌株GS‑TA‑61，该糖苷水解酶61F对内切纤维素酶的活性具有明显的促进作用。