一种发酵生产阿维拉霉素的方法

摘要

本发明公开了一种微生物发酵生产阿维拉霉素的方法，包括以下步骤：制备,产绿链霉菌的带孢子斜面，将斜面孢子接种子瓶培养得到种子液，种子液在液氮下保存；将冻存种子液接种到种子培养基中进行种子培养得到种子液；按5wt%的接种量将种子液接种到发酵培养基中进行发酵培养；发酵后的发酵液进一步处理得到阿维拉霉素的晶体。本方法简单易行，省去了繁琐的制种过程，减少了菌种衰退，降低了染菌风险；接种量容易控制，重复性好，发酵结果稳定，生产成本低。发酵结果比传统工艺有所提高，阿维拉霉素产量可以达到6500μg/ml以上。

主权项

一种发酵生产阿维拉霉素的方法，其特征为：技术方案如下：（1）制备斜面孢子将在北京北纳创联生物技术研究院购买的MCCC1A01659‑产绿色链霉菌，菌株保藏编号为1A01659，接种到斜面培养基中，进行斜面培养得到斜面孢子，斜面表面充满灰白色至微灰色孢子；（2）制备冻存种子液：a、将上述斜面孢子接种到100 ml种子培养基中，接种量为0.5×107个孢子，培养温度28℃，培养时间30 h，得到种子液，种子液中固形物占种子液总量的25% V/V；b、在上述得到的种子液中加入等体积质量分数为40%的甘油水溶液，混匀制成甘油种子液，分装在冻存管中在液氮中保存、待用；（3）种子培养：将冻存种子液按0.02% V/V接到种子培养基中，培养得到种子液，种子液中固形物占种子液总量的25% V/V；（4）发酵培养：按5%的接种量将种子液接种到发酵培养基中进行发酵培养；发酵完毕，将发酵液过滤，菌丝体用甲醇浸提，浸提液浓缩后结晶得到阿维拉晶体；其中，斜面培养基的培养条件及成分为g/L：玉米淀粉20.0，KNO3 1.0，K2HPO4 0.5，CaCl2 2.0，琼脂30.0，培养基pH 7.1；培养温度28℃，培养周期7天；其中，种子培养基的培养条件及成分为g/L：黄豆饼粉15.0，酵母粉 25.0，葡萄糖 5.0，糊精 20.0，CaCl2 2.0，CaCO3 1.0，pH 7.1；培养温度28℃，通气量1:1.05 vvm，转速175 rpm，培养时间30 h；其中，发酵培养基的培养条件及成分为g/L：玉米淀粉40.0，葡萄糖20.0，黄豆饼粉10.0， CaCl2 2.0，CaCO3 4.0，NaCl 1.0，pH 7.3；培养温度28.0℃，通气比1:0.8 vvm，罐压0.07 MPa，转速120 rpm培养220 h。