降解河豚毒素的提取液及其制备方法

摘要

本发明涉及一种从产河豚毒素的细菌发酵液中制备降解河豚毒素的物质的方法和提取液的制备检测方法，包括人工造成质粒丢失的方法、河豚毒素降解物质的提取方法、降解河豚毒素的检验方法。在本发明中，首次发现气单胞菌Aeromonas molluscorum中存在降解河豚毒素的物质，并建立了提取该物质的抽提方法，该方法有望用于降解河豚毒素物质的规模化生产。本发明涉及的细菌发酵液的抽提物具有降解河豚毒素的作用，可应用于制备用于治疗河豚毒素中毒的药物，可为科学研究、医药行业等相关领域提供原料。

主权项

一种提取降解河豚毒素的物质的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将质粒丢失的产河豚毒素的细菌发酵培养至少48小时，离心收集细胞；(2)用0.1%‑1%乙酸溶解细胞，超声波破碎细胞；(3)95‑105℃煮20‑25min，冷却后离心去除细胞碎片；(4)过滤上清；(5)对过滤液过活性碳柱，洗脱液的配方为：甲醇：1%的乙酸溶液=20：80；(6)洗脱液在40‑50℃减压浓缩，冷冻干燥；(7)溶于无菌去离子水中；(8)过Bio‑Gel P2柱子；(9)用0.02‑0.05M乙酸洗脱，收集洗脱液；(10)洗脱液再用C18Sep‑Pak cartridges过柱；(11)用5‑20ml0.3%的乙酸洗脱，收集洗脱液；(12)将洗脱液过滤；(13)过滤液冷冻干燥后，溶解在无菌去离子水中，得到降解河豚毒素的物质的提取液。