一种从白酒大曲中微生物总DNA提取的方法

摘要

本发明涉及一种白酒大曲中微生物总DNA提取的方法，其特征在于在提取DNA之前对白酒大曲进行前处理，前处理包括如下步骤：取大曲，加入前处理液：含0.05-0.2W/V％PVPP(交联聚乙烯基吡咯烷酮)和3-5W/V％土温-80或土温-60的磷酸缓冲液，pH8.0，其中大曲和前处理液的重量体积比为3-8：25，振摇；超声处理；静置后低速离心；取上清液，高速离心；去除上清液沉淀加入0.05-0.2W/V％PVPP(交联聚乙烯基吡咯烷酮)的磷酸缓冲液；打散后高速离心，去除上清液，得到样品。本发明的方法简便易行。

主权项

一种从白酒大曲中微生物总DNA提取的方法，其特征在于步骤如下：(1)取大曲，加入前处理液：含0.05‑0.2W/V％PVPP(交联聚乙烯基吡咯烷酮)和3‑5W/V％土温‑80或土温‑60的磷酸缓冲液，pH8.0，其中大曲和前处理液的重量体积比为3‑8∶25，振摇；(2)超声处理；(3)静置后低速离心；(4)取上清液，高速离心；(5)去除上清液沉淀加入0.05‑0.2W/V％PVPP(交联聚乙烯基吡咯烷酮)的磷酸缓冲液；(6)打散后高速离心，去除上清液，得到样品；(7)将样品用提取液提取，其中提取液的组成如下：100mM Tris‑HCl(三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐)pH8.0、100mM sodium EDTA(乙二胺四乙酸二钠)pH8.0、100mM磷酸钠pH8.0、1.5M NaCl和1％CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)；(8)加入蛋白酶K和溶菌酶对微生物细胞进行裂解；(9)加入等体积氯仿抽提一次、离心、收集水相；(10)用异丙醇沉淀DNA。