基于荧光偏振分析的IP₃受体靶标药物的筛选方法

摘要

本发明公开了基于荧光偏振分析的IP3受体靶标药物的筛选方法，本发明首次测定了不同温度下配体的解离平衡常数KD值，根据不同温度下配体的解离平衡常数KD值首次测定了不同温度下配体结合的自由能变。本发明与目前最精确的药物功效预测技术相比，比如电生理技术(electrophysiology)，核磁共振技术(NuclearMagneticResonance)等，它能更准确的预测药物效能(efficacy)，因为它通过热动力学可以把药物对靶点的作用进行精确的量化。另外，本发明还具有高通量和微型实验性质的优点。因此，本发明将是靶向药物功效预测的趋势所在。

主权项

基于荧光偏振分析的IP3受体靶标药物的筛选方法，其特征在于，步骤如下：A. 提供荧光标记配体、作为竞争配体的待测化合物、以及3种包含IP3结合结构域的受体多肽，所述3种包含IP3结合结构域的受体多肽分别为包含IP3结合结构域的受体IBC、包含IP3结合结构域的受体NT和包含IP3结合结构域的受体V33K‑NT；所述受体IBC是位于IP3R受体224‑604位的IP3结合中心，所述受体NT是野生型的位于IP3R受体1‑604 位的IP3受体N末端片段，所述受体V33K‑NT是受体NT的33位氨基酸突变为赖氨酸的突变型IP3受体N末端片段；B．竞争结合分析实验：将所述步骤A中的荧光标记配体、待测化合物、至少一种受体多肽置于容器内混合；C．通过荧光偏振技术测定所述步骤B的容器在不同温度下对应的荧光各向异性度A，计算对应温度下待测化合物与相应受体多肽竞争结合时的平衡解离常数KD值，根据平衡解离常数KD值计算得到相应温度下的焓变ΔH，每种受体的焓变ΔH分别表示为ΔH IBC、ΔHNT 和ΔHV33K；D.计算ΔH IBC与ΔHNT的差值，ΔHIBC与ΔHNT的差值用Δ（ΔHIBC ‑NT）表示，Δ（ΔHIBC ‑NT）的绝对值越小，则待测化合物的药效越强；或者计算ΔHV33K和ΔHNT的差值，ΔHV33K和ΔHNT的差值用Δ（ΔHV33K‑NT）表示，Δ（ΔHV33K‑NT）的绝对值越大，则待测化合物的药效越强。