发明名称 |
一种PSMA重组腺相关病毒载体及其构建方法与应用 |
摘要 |
一种PSMA重组腺相关病毒载体(rAAV)及其构建方法与其应用。该rAAV是将腺相关病毒载体中的腺相关病毒结构基因替换为肿瘤抗原基因PSMA或其突变型基因得到。本发明的rAAV可将其携带的野生型或突变型的前列腺特异性抗原基因输送入单核细胞-树突状细胞系中,被用于刺激免疫系统的效应细胞。实验证明,被本发明的rAAV感染的DC所诱导的CTL在患者体内可有效地抑制恶性肿瘤细胞的生长或者杀灭肿瘤细胞。本发明的重组腺相关病毒载体或其相关产品可被用于制备治疗前列腺癌的药物。 |
申请公布号 |
CN102268454B |
申请公布日期 |
2013.07.24 |
申请号 |
CN201110125632.7 |
申请日期 |
2008.04.23 |
申请人 |
深圳益世康宁生物科技有限公司 |
发明人 |
刘勇;张文杰 |
分类号 |
C12N15/864(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I;C12N7/01(2006.01)I;C12N5/10(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/864(2006.01)I |
代理机构 |
北京尚诚知识产权代理有限公司 11322 |
代理人 |
鲁兵 |
主权项 |
一种PSMA重组腺相关病毒载体,是将腺相关病毒载体中的腺相关病毒结构基因替换为前列腺特异性膜抗原PSMA基因,将p5启动子替换为CMV启动子、beta肌动蛋白启动子和SV40早期启动子得到的;其构建方法包括以下步骤:A.pBR‑AAV2质粒的改建:先用限制性内切酶Bst98I和Hpa I将pBR‑AAV2质粒中的腺相关病毒AAV基因组的结构基因Rep和Lip/Cap基因完全切除,然后将含有限制性内切酶EcoR I和EcoR V酶切位点的核苷酸序列CGAATTCATGCGATATCGTT插入质粒中,保留两端完整的TR序列或将AAV基因组的两端TR的第75位核苷酸序列处均插入由9个核苷酸组成的片段CTGCGCTGG;所述pBR‑AAV2质粒为携带AAV2型全基因组DNA的pBR322质粒;B.采用基因扩增技术扩增CMV启动子和SV40早期启动子;C.PCR扩增beta肌动蛋白启动子和全长PSMA cDNA;D.采用DNA连接技术,将上述扩增的CMV启动子、SV40早期启动子、beta肌动蛋白启动子和全长PSMA cDNA依次插入步骤A经改建的pBR‑AAV2载体中,为插入启动子,首先进行酶切反应,然后进行连接反应,得到携带有CMV启动子、SV40早期启动子、beta肌动蛋白启动子和全长PSMA cDNA的PSMA重组腺相关病毒载体,命名为rAAV/PSMA。 |
地址 |
518057 广东省深圳市南山区高新区北区北环大道松坪山路1号源兴科技大厦十五层南座1503室 |