一种用于微生物燃料电池的产电基因工程菌及其构建方法和应用

摘要

本发明属于生物工程技术领域，涉及微生物燃料电池产电基因工程菌的构建、菌株及其应用。通过分子生物学手段在铜绿假单胞菌PAO1中异源表达大肠杆菌中NAD+从头合成途径与回补途径同的关键基因nadE，获得产电量高的基因工程菌株铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）PA-nadE，应用于微生物燃料电池领域的发展，并且为产电铜绿假单胞菌的基因工程研究奠定了良好的基础。

主权项

一种产电基因工程菌菌株的构建方法，其特征在于包括如下步骤：1）以大肠杆菌基因组DNA为模板，纯化扩增出nadE基因，经T‑A克隆插入到T载体pMD19‑T Simple相应的位点之间、经测序，比对正确，获得中间重组质粒pMD19‑T‑nadE；2）以中间重组质粒pMD19‑T‑nadE为模板，纯化扩增出nadE基因，插入到表达质粒pBBR1MCS‑5相应的酶切位点之间、连接获得重组质粒pBBR1MCS‑nadE；3）将构建重组质粒pBBR1MCS‑nadE经电击转化导入出发菌铜绿假单胞菌PAO1的感受态，经50 μg/mL的庆大霉素筛选得到的阳性转化子即为产电基因工程菌。