高丰度蛋白质去除的二维常规柱阵列式色谱分离系统及分离方法

摘要

本发明属于蛋白质组学技术领域，具体为高丰度蛋白质去除的二维常规柱阵列式色谱分离系统，及运用该系统的分离方法。本发明仅需要一台多元液相泵、一个十通阀和两个六通阀用于进行连接和在线两维切换，提高了自动化程度和仪器的集成度。蛋白质样品经过第一维IE分离之后的馏分直接通过十通阀被依次切换转移到多通道的第二维常规反相柱柱头上进行富集，反相色谱柱直接对其在线脱盐和梯度洗脱，经过两维常规色谱分离，高丰度蛋白质可以在两维色谱图上得到精确定位，从而达到准确除去的目的。本发明方法可完成大体积进样，浓缩除盐、阵列式分离及高丰度蛋白质的定位与去除，十分适合蛋白质组学研究所需的高丰度蛋白质定位去除及高通量分析。

主权项

一种用于高丰度蛋白质去除的二维常规柱阵列式色谱分离系统，其特征在于由一个四元梯度色谱泵（3），一个配有2 mL loop的六通道进样阀（1），一个液相六通阀（8），一个十通道电动切换阀（4），一个8通道分流器（7），8个Valco三通（5），一根IE色谱柱（2），8根常规反相色谱柱组成的阵列色谱柱（6）和一个紫外检测器组成；其中，配有2 mL loop的六通道进样阀（1）与单一的IE色谱柱（2）进口端、色谱泵（3）相连构成系统的第一维IE进样分离装置；IE色谱柱（2）的出口端直接与十通阀（4）的进口端相连，十通阀（4）的出口分别与每个Valco三通（5）的一个端口（13）相连，实现第一维IE馏分到第二维阵列色谱柱（6）的转移；Valco三通（5）的另一个端口（15）直接与阵列RPLC色谱柱（6）的进口端相连，8个Valco三通（5）的第三个端口（14）与8通道分流器（7）各个端口（11）相连接；液相六通阀（8）与IE色谱柱（2）、8通道分流器（7）的端口（12）相连；阵列色谱柱（6）的出口端、紫外检测器（9）与馏分收集器（10）依次相连构成第二维阵列RPLC分离部分。