一种人类DNA STR检测用标准物质的制备方法

摘要

本发明公开了一种人类DNA STR检测用标准物质的制备方法，采用分子克隆技术制备人类DNA STR检测用标准物质。它的最大特点是将人工合成或PCR扩增获得的含有STR基因座的片段与质粒重组，将重组质粒转入细胞中，通过测序筛选出含有正确插入片段的克隆，并大量繁殖，提取重组质粒，通过酶切、纯化、混合制备出大量优质DNA STR检测用标准物质。本发明所述制备方法过程简单、成本低，本发明制备的DNA STR检测用标准物质具有良好的遗传稳定性，易于保存。

主权项

一种制备人类DNA STR检测用标准物质的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、以人类基因组作为模板，人工合成或PCR扩增获得含有人类DNA短串联重复序列基因座的目的基因片段；步骤2、将步骤1的目的基因片段与质粒载体重组，重组质粒转入到细胞中，筛选出含有目的基因片段的阳性克隆并进行测序鉴定；步骤3、提取步骤2鉴定的阳性克隆中的重组质粒，将含有不同基因型的重组质粒等比例混合，配置成人类基因组的DNA STR检测用标准物质；所述目的基因片段分别含有STR基因座CSFlPO、D2S1338、D3S1358、D5S818、D6S1043、D7S820、D8S1179、D12S391、D13S317、D16S539、D18S51、D19S433、D21S11、FGA、Penta D、Penta E、Th01、Tpox、vWA和性别标记位点Amelogenin的片段，用SEQ ID No.1‑SEQ ID No.42所示引物序列分别进行PCR扩增。