一种填充床反应器制备血管紧张素转化酶抑制肽的方法

摘要

本发明公开了一种填充床反应器制备血管紧张素转化酶（简称ACE）抑制肽的方法。将海藻酸钠与瑞士乳杆菌蛋白酶酶液混匀，用注射器滴入氯化钙溶液中，固化洗涤沥干，即得到固定化瑞士乳杆菌蛋白酶；以固定化瑞士乳杆菌蛋白酶为填充床反应器的填充载体，WPC-80浓缩乳清粉为水解底物，进行乳源ACE抑制肽的制备；水解液经中空纤维膜超滤、冷冻干燥后制成ACE抑制肽产品。本发明降低了ACE抑制肽的生产成本，可实现ACE抑制肽的连续制备。

主权项

一种填充床反应器制备血管紧张素转化酶抑制肽的方法，其特征在于，包括以下步骤:（1）海藻酸钠固定化瑞士乳杆菌蛋白酶将瑞士乳杆菌用液体MRS培养基37℃培养16‑24h，4℃，4500r/min，离心20min，收集瑞士乳杆菌菌体，并洗涤三次，取瑞士乳杆菌菌体，用pH 7.8 Tris‑HCl缓冲液重新悬浮，菌体与缓冲液比例为1g：30mL，搅匀后在300W，破碎时间3s，间隔时间5s的超声波破碎条件下破碎200次，将破碎液于4℃，4500r/min，离心20min，取上清液即为瑞士乳杆菌蛋白酶液；    在30mL蛋白含量为8mg/mL的瑞士乳杆菌蛋白酶液中加入0.6g海藻酸钠，37℃水浴搅拌混匀，4℃条件下静置备用，用注射器吸取混合液，以15cm高度滴入0.1mol/L的氯化钙溶液中，立即成球，4℃条件下静置4h，洗涤沥干，得到固定化瑞士乳杆菌蛋白酶；（2）海藻酸钠固定化瑞士乳杆菌蛋白酶填充床反应器的制备把固定化瑞士乳杆菌蛋白酶和乳清蛋白溶液充分混合后装入填充柱中；固定化瑞士乳杆菌蛋白酶和乳清蛋白溶液先于填充柱中静置水解8h，然后开启恒流泵实现连续式水解，流速为3.2mL/h，连续收集2d；3）乳源ACE抑制肽的超滤选用截留分子量为6000Da的中空纤维超滤膜进行超滤，料液温度为37℃，超滤压力为0.05Mpa，超滤液进行冷冻干燥后即得到ACE抑制肽产品。