主权项 |
灰杨组培体系的建立方法,其特征在于包括如下步骤:(1)选取健壮灰杨植株,将灰杨的叶片垂直于主脉剪伤,接种于包含或组成为MS+Kinetin0.08‑0.12mg/L+NAA0.2‑0.4mg/L+2,4‑D0.4‑0.6mg/L的培养基,暗室培养,每16‑24天继代一次;(2)取疏松、生长旺盛的愈伤组织,转入液体培养基,所述培养基为步骤(1)的培养基基础上加入25‑35g/L的蔗糖,在20‑30℃条件下避光振荡培养,转速为100‑200r/min;继代培养前,将悬浮液用150‑250目钢网过滤,除去大量损伤细胞的残存碎片,再转入新鲜培养基,继续悬浮培养,继代3~4从而建立体系;(3)从继代培养的组培苗中选取健壮、生长整齐的组培苗,剪成1.5‑2.5cm左右的茎尖茎段,植入生根培养基中,所述生根培养基为包含或组成为1/2MS+AgNO33‑5mg/L+NAA0.04‑0.06mg/L的培养基;(4)选择生长旺盛、根系发达的健壮组培苗,将瓶口的包扎物逐渐打开,使组培苗逐步适应外界环境,由开小口到完全敞开约需6‑10天,在开瓶口后加入少量的水,使用玻璃罩扣住在阳光下驯化6‑8天后移栽到花盆,移栽前把附着于幼苗根部的培养基冲洗干净;任选地,在移栽到花盆之前使用一定浓度的多菌灵溶液泡洗;移栽到花盆后仍然用玻璃罩扣养,逐步揭开玻璃罩,直到苗木在花盆中发芽生长再移入大田;灰杨组培苗移栽时,幼苗期空气相对湿度控制在80%以上,温度为18~25℃,以及适宜的光照强度。 |