副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的生产方法

摘要

本发明涉及副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的生产方法。本发明从优势流行菌株中筛选出免疫原性良好的副猪嗜血杆菌4型YBH04株、5型YBH05株和13型YBH13株作为疫苗制备菌株，分别接种于适宜培养基培养，收获菌液，经甲醛溶液灭活后，加入矿物油佐剂混合乳化制成；用于预防由4、5和13型副猪嗜血杆菌引起的猪副嗜血杆菌病；此疫苗具有安全性好、免疫效力高且免疫期长等优点。

主权项

一种副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的生产方法，其特征在于：（1）菌液培养与灭活采用发酵罐分别培养4、5、13型副猪嗜血杆菌CGMCC No.5479、CGMCCNo.5480和CGMCCNo.5501的菌液，以上3个菌株已于2011年11月23日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号分别为：CGMCCNo.5479、CGMCCNo.5480和CGMCCNo.5501：按发酵罐容积的70％加入生产用的半合成培养基，同时加入消泡剂进行消毒，待其温度降至37～38℃时，按培养基总量的2％～2.5％将种子液分别加到发酵罐内，培养温度37～38℃、搅拌转速200r/min、pH7.2、罐压0.03～0.05Mpa之间、溶氧量40％，培养时间9～10小时收获菌液，按菌液体积的0.3％加入甲醛溶液，37℃搅拌灭活24h，取样进行灭活检验后，置2～8℃保存；（2）水相制备根据活菌计数结果，将灭活的4、5、13型副猪嗜血杆菌菌液均稀释成≥12×109CFU/ml后等量混合；（3）疫苗制备按常规方法制备成矿物油佐剂灭活疫苗。