红籽鸢尾的快速繁殖方法

摘要

本发明涉及红籽鸢尾的再生快速繁殖方法，属于生物技术育种领域。以红籽鸢尾茎尖为外植体，采用随机区组设计的方法筛选出最佳诱导培养基。外植体首先诱导出愈伤组织，继代培养后诱导不定芽，而后不定芽经壮苗后转入生根培养基中生根培养，获得完整植株。愈伤组织的最适诱导培养基为MS+2，4-D1.5mg·L-1+6-BA0.1mg·L-1，最佳不定芽诱导培养基为MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1，不添加激素的MS培养基中壮苗，能得到生长健壮的无根苗，培养基MS+NAA0.2mg·L-1的生根效果最优。本发明首次针对红籽鸢尾建立了其快速繁殖体系，为红籽鸢尾生物技术育种工作提供了理论基础和实验依据，将有效推动红籽鸢尾生物技术育种的进程。

主权项

红籽鸢尾的再生快速繁殖方法，包括：a、外植体的处理    选择红籽鸢尾茎尖1cm的材料，将得到的材料于体积比10%的洗涤剂中浸泡10‑15min，流水冲洗1h，然后置于超净工作台中，依次用体积比75%乙醇浸泡45s，无菌水冲洗3次，质量体积比0.1%的升汞消毒10‑12min,无菌水浸泡冲洗4次；b、培养条件          培养室温度：25±2℃；湿度：50~70%；光照强度为2000~3000lx；光周期：12h/d； c、快速繁殖体系1）愈伤组织诱导    取a步骤中处理好的材料放置于培养皿的无菌滤纸上，吸去水分，然后将近茎尖2mm区域的组织切成2mm×2mm×2mm大小，接种于MS+2，4‑D 1.5mg·L‑1+6‑BA0.1mg·L‑1，30d后将带有愈伤的外植体继代到相同的培养基上，愈伤组织继续膨大，并陆续观察到淡绿色愈伤组织出现，愈伤组织的继代周期是4‑5周；培养基蔗糖含量为质量比3%，琼脂为质量比0.6%，pH为5.8；2）不定芽诱导    将继代2‑3次的愈伤组织接种到MS+6‑BA1.0mg·L‑1+NAA0.2mg·L‑1培养基中30d，培养基蔗糖含量为质量比3%，琼脂为质量比0.6%，pH为5.8；3）壮苗    将继代2‑3次的芽丛转接到不添加激素的MS培养基中壮苗；4）不定芽生根诱导            不定芽经壮苗后，转接于MS+NAA 0.2mg·L‑1培养基中30d生根。