检测白果过敏蛋白的双抗体夹心ELISA方法

摘要

本发明涉及检测白果过敏蛋白的双抗体夹心ELISA方法，包括以下步骤：(1)白果蛋白提取：取白果1kg，经冻干处理后研磨，加入5～7倍体积石油醚脱脂，用pH8.5，0.15mol/LTris-HCl溶液提取白果蛋白，经冷冻离心后得到蛋白上清液，经过40％-80％饱和度的硫酸铵沉淀，再次冷冻离心，得到沉淀用0.01mol/L、pH7.4磷酸盐缓冲液溶解，并用所述磷酸盐缓冲液进行透析，透析完全后，冷冻干燥，得到白果蛋白提取物；所述白果蛋白提取物用上述磷酸盐缓冲液溶解，得到白果蛋白提取物溶液；(2)鼠源过敏原特异性抗体IgE的制备(3)双抗体夹心ELISA方法检测白果过敏蛋白。本发明能筛选白果及其制品中过敏蛋白。

主权项

一种检测白果过敏蛋白的双抗体夹心ELISA方法，其特征在于包括以下步骤：（1）白果蛋白提取取白果1kg，经冻干处理后研磨，加入5～7倍体积石油醚脱脂，用pH 8.5，0.15mol/LTris‑HCl溶液提取白果蛋白，经冷冻离心后得到蛋白上清液，经过40%‑80%饱和度的硫酸铵沉淀，再次冷冻离心，得到沉淀用0.01mol/L、pH7.4磷酸盐缓冲液溶解，并用所述磷酸盐缓冲液进行透析，透析完全后，冷冻干燥，得到白果蛋白提取物；所述白果蛋白提取物用上述磷酸盐缓冲液溶解，得到白果蛋白提取物溶液；（2）鼠源过敏原特异性抗体IgE的制备小鼠经100mg/ml白果蛋白提取物溶液经口灌胃致敏、200mg/ml白果蛋白提取物溶液腹腔注射激发，激发后1h取血，分离小鼠抗血清，从小鼠抗血清中分离得到鼠源过敏原特异性抗体IgE；（3）白果过敏蛋白的检测将鼠源过敏原特异性抗体IgE固定在载体上；加入待测样本，使其中可能存在的过敏原与鼠源过敏原特异性抗体IgE结合，形成结合物；再加入酶标记二抗，使其与鼠源过敏原特异性抗体IgE结合成为复合物；最后显色剂显色，根据颜色变化判定样本中过敏蛋白的存在与否及过敏蛋白浓度。