表达发卡RNA的DNA分子及其构建方法与应用

摘要

提供了表达发卡RNA的DNA分子及其构建方法和应用。该DNA分子是由A、B、C和D四个DNA片段按A-C-B-D或A-D-B-C的顺序依次连接构成的封闭单链环状DNA分子；A是目的双链DNA片段的正义链或反义链片段；B是与A反向互补的片段；C和D均为具有茎环结构的DNA，且二者满足以下任一条件：1)该C或D片段的核苷酸序列中至少含有一个序列e；2)该C片段的核苷酸序列中含有至少一个序列e，所述D片段的核苷酸序列中含有至少一个序列f，所述序列e和序列f为不同的限制性核酸内切酶识别序列中的一条链。这种表达发卡RNA的DNA分子及其构建方法有助于构建lhRNA文库。

主权项

表达发卡RNA的DNA分子，是由A、B、C和D四个单链DNA片段组成的封闭单链环状分子；所述A、B、C和D四个片段按如下1）或2）顺序依次连接：1）A‑C‑B‑D；2）A‑D‑B‑C；A为选自目的双链DNA片段的正义链或反义链的片段，所述A的大小为40‑3000 nt；B为与A反向互补的片段；所述片段A和B可以形成带有两个不能自连的粘性末端的目的双链DNA片段；C和D为具有茎环结构的DNA片段，所述C和D片段满足如下3）或4）的条件：3）所述C或D片段的核苷酸序列中含有至少一个序列e，所述序列e与其互补链形成限制性核酸内切酶的识别序列R；4) 所述C片段的核苷酸序列中含有至少一个序列e，所述序列e与其互补链形成限制性核酸内切酶的识别序列R；所述D片段的核苷酸序列中含有至少一个序列f，所述序列f与其互补链形成限制性核酸内切酶的识别序列S；所述识别序列R和识别序列S被不同的限制性核酸内切酶识别。