一种植物原位再生的方法及其在遗传转化中的应用

摘要

本发明属于生物学和生物技术领域，公开了一种植物原位再生及农杆菌转化的方法。本方法是将农杆菌涂抹在植物砧木伤口上，再将植物离体组织在培养基上诱导产生的愈伤组织作为接穗，劈接法嫁接到砧木上。砧木伤口细胞在外源愈伤组织的诱导下，可以实现原位器官再生，从而得到转基因再生芽。与传统的结合组培的植物遗传转化相比，本发明避免了逐一基因型摸索组培条件，为植物的遗传转化提供了新的技术平台，同时本发明也建立了一种新的植物再生体系，为植物发育生物学研究提供了研究系统。

主权项

一种植物原位再生的方法，其特征是：A、接穗的获得选取发育饱满无病害的辽园多丽番茄种子，作消毒无菌处理；接种于MS培养基中，于25℃光照培养箱中日光照16h，培养获得无菌苗；取子叶完全展开、但真叶还未萌发的无菌苗，将子叶、下胚轴切小段作为外植体，置于含有1mg/L 玉米素的MS培养基上，于25℃光照培养箱中诱导愈伤组织；获得新鲜愈伤组织作为接穗；B、嫁接取长有5‑10片叶子的健壮辽园多丽番茄或盆栽番茄作为砧木，在砧木顶芽下方横切去头，再垂直向下切口,将用作接穗的新鲜愈伤切成楔形，插入砧木切口中嫁接；C、砧木原位再生嫁接后，愈伤组织接穗诱导砧木伤口产生愈伤组织并萌发再生芽。