金属硫蛋白转基因酵母的构建及利用其制备重金属生物吸附材料的方法

摘要

本发明属于环境工程重金属污染治理领域，涉及一种金属硫蛋白转基因酵母的构建及利用金属硫蛋白转基因酵母制备生物吸附材料的方法。利用rDNA在酵母细胞内存在100-200个重复单元的特点，以rDNA作为同源整合位点构建酵母金属硫蛋白多拷贝整合表达载体，并使其在S.cerevisiae4126中利用S.cerevisiae288c3-磷酸甘油酸激酶基因（PGK1）启动子进行表达，实现了酵母金属硫蛋白的多拷贝表达，获得对重金属有较高耐受性和吸附性的金属硫蛋白转基因酵母，进而提供一种经济、安全的利用金属硫蛋白转基因酵母制备重金属生物吸附材料的方法。

主权项

一种金属硫蛋白转基因酵母的构建，其特征在于：将从酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae288c中克隆的金属硫蛋白基因连接到pFA6a载体上，然后再将S.cerevisiae288c3‐磷酸甘油酸激酶基因（PGK1）启动子拼接到载体上，最后将S.cerevisiae288c rDNA基因作为同源臂连接到上述载体上，从而得到具有重金属吸附功能的多拷贝整合表达载体pFA6a‑PGK1‑cup1‑rDNA，将其线性化后转化酿酒酵母S.cerevisiae4126细胞内，利用G418作为筛选标记，即可筛选到具有重金属吸附功能的金属硫蛋白转基因酵母。