转基因提高丹参中丹酚酸B含量的方法

摘要

一种转基因提高丹参中丹酚酸B含量的方法，由下述步骤组成：采用基因克隆获得拟南芥花青色素生成转录因子1基因的cDNA全长；构建含有所述基因的植物表达载体；将上述载体转化根癌农杆菌EHA105，获得含所述基因的根癌农杆菌菌株；用根癌农杆菌菌株转化丹参，培养并获得经聚合酶链式反应检测的转基因丹参植株；半定量逆转录-聚合酶链式反应检测转基因丹参中拟南芥花青色素生成转录因子1基因的表达；对所述基因表达的转基因丹参中丹酚酸B含量进行高效液相色谱测定，筛选得到丹酚酸B含量提高的转基因丹参植株。采用本发明获得的转基因丹参植株，生长165天的干燥根中，丹酚酸B的含量高达73.27mg/g，是非转化普通丹参干燥根中丹酚酸B含量的2倍。

主权项

一种转基因提高丹参中丹酚酸B含量的方法，其特征在于该方法由下述步骤组成： (1)采用基因克隆方法获得拟南芥花青色素生成转录因子1基因的cDNA全长，其基因克隆方法为；设计可扩增出拟南芥花青色素生成转录因子1基因完整编码框的引物，并在上游和下游引物上分别引入BglII和BstEII限制性酶切位点，上游引物为5’‑AGATCTATGGAGGGTTCGTCCAAAGG‑3’，下游引物为5’‑GGTAACCCTAATCAAATTTCACAGTCTCTCCATC‑3’，以拟南芥cDNA为模板，经聚合酶链式反应扩增，获得的扩增产物进行电泳分离，回收后与pGEM T‑easy载体连接，转入大肠杆菌DH5α，测序验证并得到所述基因的cDNA编码序列； (2)把拟南芥花青色素生成转录因子1基因连接于表达调控序列，形成含有所述基因的植物表达载体； (3)将含有拟南芥花青色素生成转录因子1基因的植物表达载体转化根癌农杆菌EHA105，获得用于转化丹参的含有所述植物表达载体的根癌农杆菌菌株； (4)用所构建的根癌农杆菌菌株转化丹参，培养并获得经聚合酶链式反应检测的转基因丹参植株； (5)半定量逆转录‑聚合酶链式反应检测转基因丹参植株中拟南芥花青色素生成转录因子1基因的表达； (6)对获得的转基因丹参植株中丹酚酸B含量进行高效液相色谱测定，筛选获得丹酚酸B含量提高的转基因丹参植株。