毕赤酵母表达重组人白介素11的生产方法

摘要

本发明公开了一种毕赤酵母表达重组人白介素11的生产方法，该方法包括反相柱层析、疏水柱层析、凝胶柱层析顺序组合纯化，能够大规模制备得到高纯度的药用重组人白细胞介素11蛋白。

主权项

一种毕赤酵母表达重组人白介素11的生产方法，其特征在于，毕赤酵母发酵后，发酵液上清依次进行反相柱层析、疏水柱层析和凝胶柱层析纯化得到白介素11，其包括如下步骤：（1）所述反相柱层析过程中，反相层析柱填料为反相介质SOURCE15RPC或SOURCE30RPC，所述反相层析流动相选自三氟醋酸‑乙腈体系，以0.01‑1.0%的三氟醋酸为流动相A，以0.01‑1.0%的三氟醋酸加40‑100%的乙腈为流动相B，将离心后的发酵液上清经5微米微孔滤膜过滤后直接上样后，用流动相A平衡柱子；当所有未结合在柱上的组分流出后，用30%的流动相B冲洗2‑3个柱体积，将大部分蛋白聚体、内毒素等杂质洗脱；最后用30‑50%的流动相B梯度洗脱目标峰；（2）所述疏水柱层析过程中，疏水柱填料为Phenyl或SOURCE ISO基团的疏水介质，所述疏水柱层析的流动相选自20‑50mM Tris‑HCl、Gly‑NaOH或磷酸缓冲液，pH的范围在6.0‑10.0，加入0.5‑1.6mol/L(NH4)2SO4或0.5‑1.6mol/L Na2SO4的缓冲液为流动相A，以不含(NH4)2SO4或Na2SO4的缓冲液为流动相B；反相目标峰用pH的范围在6.0‑10.0、20‑50mM Tris‑HCl、Gly‑NaOH或磷酸缓冲液稀释10‑20倍，降低反相目标峰中的乙腈浓度；在上述稀释液中直接加入高浓度的(NH4)2SO4或Na2SO4溶液至浓度为0.8‑1.6mol/L(NH4)2SO4或0.8‑1.6mol/L Na2SO4，上样于疏水柱，然后以流动相A平衡柱子，再以0‑100%流动相B梯度洗脱，收集目标峰；（3）所述凝胶柱层析过程中，凝胶柱填料为低吸附的介质Sephacryl、Superdex或Sephadex，所述凝胶柱层析的流动相为5‑10mM的磷酸缓冲液，得到的重组人白细胞介素11纯度大于97%以上，生物学活性达到0.8×107U/mg以上,所述的重组人白细胞介素11可以直接用于制剂的配制，而无须采用透析等其他改换溶液体系的处理。