检测点突变基因的方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种检测点突变基因的方法，以突变基因为模板，通过连接反应将两条与点突变基因互补且相邻的寡核苷酸探针连接成一条完整寡核苷酸链，并在寡核苷酸链上标记电化学发光分子。然后通过磁性微球捕获并分离出完整寡核苷酸链，最后用电化学发光分析仪检测完整寡核苷酸链上标记的电化学发光分子，通过比较待检测基因样品与空白溶液的电化学发光信号强度的差异检测出点突变基因。本发明还公开了检测点突变基因的试剂盒，包含：两条与点突变基因序列互补的寡核苷酸探针、连接酶、以及表面标记有捕获分子的磁性微球。本发明检测点突变基因的方法，检测灵敏度高，检测结果准确、可靠，在肿瘤分子诊断、遗传分子诊断等领域有很好的应用前景。

主权项

一种检测点突变基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：设计两条与点突变基因序列互补且相邻的寡核苷酸探针，即探针Ⅰ和探针Ⅱ，其中探针I的5’端标记有识别分子，其3’端的最后一个碱基与点突变的碱基互补配对；探针Ⅱ的5’端的第一个碱基与点突变碱基相邻的碱基互补配对，其3’端标记有电化学发光分子；将所述寡核苷酸探针与待检测基因混合，该两条寡核苷酸探针以点突变基因为模板，在连接酶的作用下通过连接反应连接成一条完整的寡核苷酸链探针，其5’端标记有识别分子，3’端标记有电化学发光分子；将表面标记有捕获分子的磁性微球与连接反应产物混合，通过捕获分子与识别分子的特异性结合，将连接后完整的寡核苷酸链探针固定在磁性微球的表面；通过外加磁场分离出磁性微球；将分离出的磁性微球加入电化学发光检测池中，用电化学发光检测仪检测连接后完整寡核苷酸链探针上的电化学发光分子信号，通过比较待检测基因样品与空白溶液的电化学发光信号强度的差异检测出点突变基因。