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一种贯众的繁殖方法，其特征是该方法包括如下工艺步骤：一、培养基配制；二、贯众孢子的灭菌；三、接种及培养；四、贯众孢子体苗的分苗、移栽；所述的工艺步骤一、培养基配制，分1）MS（Murashige and Skoog）固体培养基：0.7％（W/V）琼脂，pH 5.8；2）煮沸后分装至100ml三角瓶中，然后121 ℃，高压0.1Mpa蒸汽灭菌20 min；所述的工艺步骤二、贯众孢子的灭菌，分1）用滤纸包裹住贯众的成熟孢子，用线捆住纸包，投入4‑6％NaClO水溶液，不时摇动，灭菌4 min；2）用无菌水冲洗4‑5遍；3）打开纸包，用滴管吸取无菌水，并将贯众孢子冲洗至10 ml离心管内，用旋涡混合器混合使成悬浊液，获得无菌贯众孢子悬浊液；所述的工艺步骤三、接种及培养，分1）在无菌条件下，先用无菌水将上述配制的MS培养基的表面湿润，使MS培养基表面形成一层薄薄的水膜，以倾斜三角瓶时，视汇集在底部的水不能让滴管吸上连续的水滴为宜；2）用滴管将工艺步骤二获得的无菌贯众孢子悬浊液，均匀接种在培养基表面上，接种密度为2000‑ 2500个孢子/cm2；3）接种后，在温度23‑27℃，无光照下培养24‑36 h；4）转至光照下继续培养，其光照强度为2000‑2300 lx，光源为荧光灯，光照时间为每天10‑14h，培养7天；所述的工艺步骤四、贯众孢子体苗分苗、移栽，分 1）培养7天后，孢子开始萌发，经30‑32天形成配子体，65天形成孢子体苗，当叶片高度2‑4 cm，将叶片为2片以上无菌孢子体苗置于自然光照下炼苗6‑8 天；再置于空气中在自然光照下炼苗6‑8 天；2）打开瓶盖炼苗7天，然后用镊子轻轻夹出单株试管苗；3）洗净培养基后，将单株试管苗移栽至装有混合土的穴盘中，并放在阴凉避光处缓苗4‑5天，然后移至温室培养，温室培养的温度为23‑27℃，光照强度为2000‑2300 lx，光照时间为10‑14h/天；所述的混合土包括的各组份的体积百分比为，草炭土：蛭石：珍珠岩＝2：1：1；4）幼苗长至9‑11 cm，将其移栽到装有培养基质的塑料盆中，置温室培养，夏秋遮荫，春冬季保持白天温度21‑26℃，夜间温度10‑16℃，空气湿度70‑90％，缓苗25‑35天，每半月浇MS（Murashige and Skoog）营养液；所述的营养液除不含琼脂外，其他成分与MS（Murashige and Skoog）固体培养基相同；所述的培养基质，其包括的各组份的体积百分比为：草炭土：蛭石：珍珠岩：有机肥＝4：2：2：1。 |
