| 摘要 |
一种利用氨基转移酶合成手性环状烷基氨基酸的方法，选用已经在市场上商业化的原料酮酸或其相应的可溶性酮酸盐类化合物为初始原料，将初始原料溶解于磷酸盐缓冲液；然后加入氨基供体；将磷酸吡哆醛（PLP）和氨基转移酶主酶加入到含氨基供体及主原料酮酸或其相应的可溶性酮酸盐类化合物的体系中，恒温条件下反应，得到较高ee值的产品<img file="DDA00002984795100011.GIF" wi="313" he="217" />n=1,2,3,4,5，或<img file="DDA00002984795100012.GIF" wi="208" he="278" />n=0,1。该方法工艺条件稳定，操作简单，收率高，成本低，且利于环境保护，适用于规模化生产，为制备手性氨基酸化合物提供了一种新的思路和方法。 |
| 主权项 |
1.利用氨基转移酶合成手性环状烷基氨基酸的方法，其特征在于具体步骤如下：（1）投料：向反应釜中加入主原料酮酸或其可溶性铜酸盐类化合物，其中酮酸结构式为<img file="FDA00002984794800011.GIF" wi="237" he="168" />n=1,2,3,4,5，或<img file="FDA00002984794800012.GIF" wi="146" he="230" />n=0,1；可溶性酮酸盐类化合物的结构式为<img file="FDA00002984794800013.GIF" wi="264" he="200" />n=1,2,3,4,5，X为可使相应酮酸形成可溶性盐的金属，或<img file="FDA00002984794800014.GIF" wi="200" he="313" />n=0,1，X为可使相应酮酸形成可溶性盐的金属，加入磷酸盐缓冲液，使主原料酮酸或其可溶性铜酸盐类化合物均匀溶解于磷酸盐缓冲液中，其中磷酸盐缓冲液浓度为50-200mM,pH=8.0；酮酸或其可溶性酮酸盐类化合物与磷酸盐缓冲液的用量比为1g/10～100mL；（2）加氨基供体：向反应釜中，加入氨基供体，所述氨基供体为L-氨基酸或D，L-氨基酸，搅拌至全部溶解，调节体系至pH=6～9；其中，酮酸或其可溶性酮酸盐类化合物与氨基供体的摩尔比为1：1～10eq；（3）加氨基转移酶及辅酶：向反应釜中，加入辅酶磷酸吡哆醛和氨基转移酶主酶，氨基转移酶主酶为来源于Enterobacter sp.TL3的氨基转移酶主酶BcATen、来源于Escherichia coli K12的氨基转移酶主酶BcATes或来源于E.coli的氨基转移酶主酶AAT；其中，酮酸或其可溶性酮酸盐类化合物与磷酸吡哆醛的摩尔比为1：0.01～0.1；酮酸或其可溶性酮酸盐类化合物与氨基转移酶主酶的用量比为1g/0.01～0.5g；（4）反应：体系于反应釜中搅拌，搅拌速度为150rpm～250rpm，并于20～40℃下反应24～72h；（5）后处理：体系取样跟踪，原料转化完毕，向体系中滴加酸调节至体系pH<1，然后体系用硅藻土过滤，滤液再用可形成可溶性盐的无机碱调节体系pH=5～6，控制体系温度，使其小于30℃，将滤液浓缩，抽滤，淋洗，得到固体粗产品，再经离子交换树脂纯化，浓缩得到纯度较高的产品<img file="FDA00002984794800021.GIF" wi="281" he="206" />n=1,2,3,4,5或<img file="FDA00002984794800022.GIF" wi="212" he="268" />n=0,1；纯度95.0～98.0％，收率52.3～85.0％，ee值93.6～99.5%，MS(M+H)+=144.1～172.1；其中，酮酸或其可溶性酮酸盐类化合物与离子交换树脂的用量比为5～15：1。 |
