具有抗植物病原菌作用的银杏内生真菌抗菌发酵液的制备方法

摘要

本发明涉及具有抗植物病原菌作用的银杏内生真菌抗菌发酵液的制备方法，所述银杏内生真菌命名为腐皮镰孢T-7，保藏在微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2011年7月20日，保藏编号为CGMCC No.5089。所述抗菌发酵液的具体制备操作步骤如下：（1）菌种活化，（2）一级、二级种子培养，（3）发酵培养，所得发酵液为橙红色。抗菌试验发现：本发明的银杏内生真菌T-7的抗菌发酵液对供试的5种植物病原真菌（番茄枯萎病菌，苹果腐烂病菌，苹果炭疽病菌，梨黑星病菌，小麦赤霉病菌）的菌丝生长具有较为明显的抑制作用。本发明以植物内生真菌作为资源，以求获得抗植物病原真菌病害的新型农用抗生素类天然活性物。

主权项

具有抗植物病原菌作用的银杏内生真菌抗菌发酵液的制备方法，其特征在于：所述银杏内生真菌命名为腐皮镰孢T‑7 (Fusarium solani T‑7)，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2011年7月20日，保藏编号为CGMCC No.5089；所述抗菌发酵液的具体制备操作步骤如下：（1）菌种活化     在无菌条件下，用接种环挑取少许保藏的银杏内生真菌的菌种，转接于已灭菌的马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基平板中，恒温避光培养5天，培养温度28℃±1℃，得到活化菌种；（2）种子培养无菌条件下，利用接种环挑取3环活化菌种，接种于50ml的马铃薯葡萄糖液体培养基内，恒温摇床培养2天，摇床转速160转/分，温度28℃±1℃，得到一级种子； 将一级种子，以10%接种量，接种于50ml的液体培养基中，恒温摇床培养2天，摇床转速160转/分，温度28℃±1℃，得到二级种子； （3）发酵培养将二级种子接种到50ml的液体培养基中，接种量10%，恒温摇床培养7天，摇床转速160转/分，温度28℃±1℃，得到银杏内生真菌发酵液；发酵液过滤除去菌丝体，无菌条件下，过0.22微米过滤器，即得到银杏内生真菌T‑7的抗菌发酵液；发酵培养特征：培养第1天，菌体为少量淡粉色的粉末；培养第3天，淡粉色的细粉末减少，出现粉色的小菌丝球；培养第5天，粉红色菌丝球继续增多，体积变大，发酵液为橙红色；培养第7天，出现大量红色的菌丝球，体积变大，银杏内生真菌T‑7的抗菌发酵液为橙红色；所述马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基：马铃薯 200克、葡萄糖20克、琼脂18克、蒸馏水1升；所述马铃薯葡萄糖液体培养基的制备：马铃薯200克，葡萄糖20克、蒸馏水1升，pH自然；所述液体培养基：蛋白胨15克，葡萄糖 20克，硝酸钠1克，氯化钙 0.5克，硫酸镁0.1克，磷酸氢二钾0.1克，蒸馏水1升，pH自然；上述三种培养基使用前在温度121℃、压力0.1MPa下，灭菌30 min。