发明名称 |
一种利用基因共转化策略获取喜树碱新型药源的方法 |
摘要 |
本发明涉及生物工程技术领域,是提高喜树碱新型药源植物短小蛇根草毛状根中喜树碱含量的方法。从长春花中克隆异胡豆苷合成酶和香叶醇-10-羟化酶基因的编码框序列,构建含上述基因的植物双价高效表达载体,以发根农杆菌介导法遗传转化短小蛇根草获得转CrSTR和CrG10H基因的短小蛇根草毛状根;利用植物激素诱导处理高产喜树碱株系,获得了喜树碱含量为4.703mg/g DW的高产毛状根。MTT检测证明,通过转基因方式获得的喜树碱粗提物具有良好的生物活性,肿瘤细胞杀伤力达35.9%。本发明为获取喜树碱提供了一种新型药源,也为生产具重要临床需求的抗癌药物喜树碱提供了一种新方法。 |
申请公布号 |
CN103194487A |
申请公布日期 |
2013.07.10 |
申请号 |
CN201310139348.4 |
申请日期 |
2013.04.19 |
申请人 |
上海师范大学 |
发明人 |
滕小娟;开国银;季倩;时敏;崔丽洁 |
分类号 |
C12N15/82(2006.01)I;C12N15/60(2006.01)I;C12N15/53(2006.01)I;A01H5/06(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/82(2006.01)I |
代理机构 |
上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 |
代理人 |
吴瑾瑜 |
主权项 |
一种利用基因共转化策略获取喜树碱新型药源的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将异胡豆苷合成酶基因CrSTR和香叶醇‑10‑羟化酶基因CrG10H插入植物表达载体,构建重组载体;(2)将步骤(1)所获得的重组载体转入发根农杆菌,构建含有重组载体的发根农杆菌;(3)利用所构建的含有重组载体的发根农杆菌菌株遗传转化短小蛇根草,获得毛状根;(4)检测步骤(3)毛状根中的CrSTR和CrG10H基因,取筛选结果为阳性的转基因毛状根克隆;(5)利用植物激素对获得的转基因毛状根进行诱导,使其喜树碱含量进一步提高。 |
地址 |
200234 上海市徐汇区桂林路100号 |