动物细胞“友好”基因座的筛选载体和筛选方法

摘要

本发明涉及一种动物细胞“友好”基因座的筛选载体和筛选方法。动物细胞培养生产产品的总产量，由每个细胞的单产和细胞总数共同决定。增加细胞单产和改善细胞培养条件，对提高动物细胞培养产品的产量均有重大作用。但是，近30年来，动物细胞培养技术研究的重点，主要集中在解决细胞大规模培养设施和培养技术，对提高每一个细胞的单产研究较少，特别是在研制高产基因工程细胞株方面，成效甚微。本发明借鉴转基因动物研究的发现，设计了一套技术方案，用来从动物基因组数万个基因座(Locus)中，筛选出允许外源基因高水平表达的“友好”基因座。在筛选基因座的同时，将能使基因序列高频率交换的CRE/Lox P系统插入出的基因座，使同一个基因座表达不同外源基因成为可能，从而建立了外源基因定点表达的技术体系。本发明是现有动物细胞大规模培养技术的重要补充和改进。

主权项

一种动物细胞“友好”基因座的筛选载体，其特征在于：所述载体由骨架部分和关键功能部分组成，所述骨架部分包括M13的DNA复制子Ori、在大肠杆菌中的筛选标记基因Amp、在真核细胞中的筛选标记基因Noe以及人的巨大病毒早期蛋白基因的启动子CMV，所述关键功能部分包括引导肽、标记基因GFP、连续的三个蛋白酶识别位点、His‑tag以及LoxP和Lox2272序列，所述关键功能部分的的基因序列如SEQ ID NO：1。