一种利用新型纳米硅材料固定化果胶酶的方法

摘要

本发明涉及一种利用新型纳米硅材料固定化果胶酶的方法。它是以逐层自组装技术制备新型纳米硅材料，并对该材料进行活化，改性和包被，通过戊二醛交联实现果胶酶的高效固定化。本发明所制备的固定化载体具有蛋白质载量大的优点，所得的固定化果胶酶具有酶活损失小，酶不易脱落，可反复使用的特点。

主权项

一种利用新型纳米硅材料固定化果胶酶的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)纳米硅材料制备：4.0‑5.0g F127，20‑30g氯化钾，240‑300ml去离子水，50ml盐酸，混合加入夹层烧杯中，15℃环境下搅拌均匀后，再加入TMB，搅拌3‑4h后，加入逐滴滴加正硅酸乙酯20‑30ml，搅拌20h，装釜。放入100‑150℃烘箱，晶化，24h后取出。用酒精和去离子水洗涤，80‑100℃烘干12h。放入马弗炉中煅烧。温度5℃/min上升到450‑500℃，保持6h。冷却后，即得到纳米硅材料。(2)纳米硅材料的活化：称取十二烷基磺酸钠0.6‑0.8克，加二次蒸馏水100ml，加热溶解；称取处理过的纳米硅材料1.5‑2.0克，加入到上述溶液中，超声处理10min，浸泡24h。倾去上层未吸附的十二烷基磺酸钠溶液，加1.0‑2.0％壳聚糖溶液50‑60ml，浸泡过夜。将纳米硅材料离心出来，加入2.5％戊二醛溶液20‑30ml，交联4h后，水洗离心，置于真空干燥箱中，直至干燥呈粉末状。(3)果胶酶在纳米硅材料上的组装：用去离子水配制2％的果胶酶溶液，离心，取上清液。将活化后的载体加入酶溶液中，调节pH至4.0‑5.0，在25℃恒温振荡器中反应4h，离心分离，沉淀即为固定化果胶酶。