检测磷酸化表皮生长因子受体的试剂盒及其制备方法

摘要

本发明公开了一种检测磷酸化表皮生长因子受体的试剂盒，采用蛋白质芯片技术，包括(1)同时固定有若干种特异性抗体的底膜，特异性抗体与磷酸化表皮生长因子受体能够发生抗体-抗原反应，每种特异性抗体分别固定于底膜形成若干个独立识别位点；和(2)反应剂和检测剂，用于通过array-ELISA方法检测待测样品中是否存在能够与特异性抗体发生抗体-抗原反应的物质。本发明还公开了一种检测磷酸化表皮生长因子受体试剂盒的制备方法。采用本发明，能够对多个样品同时检测十七项磷酸化表皮生长因子受体，克服了现有技术的诸多缺陷，具有廉价、便利、灵敏、准确、高通量、标本用量少、能在普通实验室推广和规模化等优点。

主权项

一种检测磷酸化表皮生长因子受体的试剂盒，采用蛋白质芯片技术，其特征在于包括：（1）同时固定有若干种特异性抗体的底膜，所述特异性抗体与磷酸化表皮生长因子受体能够发生抗体‑抗原反应，每种特异性抗体分别固定于所述底膜形成若干个独立识别位点，所述特异性抗体为选自如下蛋白质之抗体：EGFR(Tyr845)， EGFR (Tyr1068)，EGFR (Tyr1086)，EGFR (Tyr1148)，EGFR (Tyr1173)， EGFR (Ser1070)， ErbB2 (Tyr1112)，ErbB2 (Tyr1221/1222)， ErbB2 (Thr686)，ErbB2 (Ser1113), ErbB3 (Tyr1289) ，ErbB4 (Tyr1284) ，上述各种特异性抗体分别固定于所述底膜形成独立识别位点；和（2）反应剂和检测剂，用于通过array‑ELISA方法检测待测样品中是否存在能够与所述特异性抗体发生抗体‑抗原反应的物质；其中反应剂包括抗体混合液，且所述抗体混合液中的特异性抗体标记有生物素，其中所述抗体混合液由如下蛋白质之特异性抗体组成：EGFR(Tyr845)，EGFR (Tyr992)，EGFR (Tyr1045)，EGFR (Tyr1068)，EGFR (Tyr1086)，EGFR (Tyr1148)，EGFR (Tyr1173)，EGFR (Ser1046/1047)，EGFR (Ser1070)，ErbB2 (Tyr877)，ErbB2 (Tyr1112)，ErbB2 (Tyr1221/1222)，ErbB2 (Tyr1248)，ErbB2 (Thr686)，ErbB2 (Ser1113), ErbB3 (Tyr1289) ，ErbB4 (Tyr1284)； 其中，针对EGFR(Tyr845)的抗体为BD Biosciences提供，批号为558381；针对EGFR(Tyr992)的抗体为Cell Signaling Technology提供，批号为2235；针对EGFR(Tyr1045)的抗体为Raybiotech提供，批号为2237s；针对EGFR (Tyr1068)的抗体为Cell Signaling Technology提供，批号为2234；针对EGFR (Tyr1086)的抗体为Raybiotech提供，批号为44‑790G；针对EGFR (Tyr1148)的抗体为Upstate提供，批号为07‑891；针对EGFR (Tyr1173)的抗体为Cell Signaling Technology提供，批号为4407s；针对EGFR(Ser1046/1047)的抗体为Cell Signaling Technology提供，批号为2238s；针对EGFR (Ser1070)的抗体为Abcam提供，批号为ab38503；针对ErbB2(Tyr877)的抗体为Cell Signaling Technology提供，批号为9923；针对ErbB2 (Tyr1112)的抗体为abgent提供，批号为AP3093a；针对ErbB2 (Tyr1221/1222)的抗体为Cell Signaling Technology提供，批号为2249；针对 ErbB2(Tyr1248)的抗体为R&D提供，批号为AF1768；针对ErbB2 (Thr686)的抗体为Abcam提供，批号为ab11717；ErbB2 (Ser1113)的抗体为EMD4Biosciences提供，批号为OP195；针对ErbB4 (Tyr1289)的抗体为Cell Signaling Technology提供，批号为4791；针对ErbB4 (Tyr1284)的抗体为Cell Signaling Technology提供，批号为4757。