一种利用RNA恒温扩增的结核分枝杆菌核酸检测试剂盒

摘要

本发明涉及一种利用RNA恒温扩增的结核分枝杆菌核酸检测试剂盒，试剂盒包含TB稀释液、TB反应液、TB检测液、SAT酶液、TB阳性对照、TB阴性对照；结核分枝杆菌经液化处理后通过加药培养和不加药培养，利用两种方法培养后的结核分枝杆菌之间存在的差异，利用免疫共沉淀或NaOH再处理两种培养后的结核分枝杆菌菌液，并对处理后的菌液进行SAT检测，根据检测结果来分析结核分枝杆菌的耐药性。本发明能简单有效的对结核分枝杆菌耐药性进行分析，简便，省时。

主权项

一种利用RNA恒温扩增的结核分枝杆菌核酸检测试剂盒，包括：（1）TB稀释液：为含RNase抑制剂的灭菌DEPC水溶液；（2）TB反应液：具体包含Tris10~50mM，MgCl210~40mM，dNTP0.5~5mM，NTP1~10mM，PVP401~10%，KCl5~40mM；（3）TB检测液：为恒温扩增时必需的TB引物和TB荧光探针溶解在TE溶液中配制而成，其中TB检测液中的TB引物和TB荧光探针的序列为：TB T7：aatttaatac gactcactat agggagacac caacaagctg ataggccgcg gTBnT7：gcaagtcgaa cggaaaggtc tcTB Probe：cguccggaua ggaccacggg acg；所述的TB荧光探针为分子信标；（4）SAT酶液：为恒温扩增时必需的多酶组分体系，含T7RNA聚合酶200~2000U/反应、M‑MLV反转录酶400~4000U/反应、2~10mM HEPES pH7.5、10~100mMN‑acetyl‑L‑cysteine、0.04~0.4mM zinc acetate、10~100mM trehalose、40~200mMTris‑HCl pH8.0、40~200mM KCl、1~10mM EDTA、2~20%(v/v)Triton X‑100、10~40%(v/v)glycerol；（5）TB阳性对照；为含102～105CFU/ml结核分枝杆菌的菌液；（6）TB阴性对照：为含有上述TB稀释液。