应用生物反应器工业化生产猪瘟活疫苗的方法

摘要

本发明涉及一种应用生物反应器工业化生产猪瘟活疫苗的方法，包括如下步骤：(1)将微载体和生物反应器经灭菌后，加入细胞生长液，接种制苗用细胞进行培养，待微载体上的细胞形成致密的单层，弃去细胞生长液，加入病毒维持液并接种猪瘟病毒，继续培养使病毒繁殖；(2)接毒后18h，连续收获病毒培养液于-15℃以下保存，合并病毒培养液加冻干保护剂制备猪瘟活疫苗。本发明具有工艺参数可控性好，细胞培养密度高，病毒滴度高，疫苗安全性好、质量稳定可靠，生产效率高等优点。

主权项

应用生物反应器工业化生产猪瘟活疫苗的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）将微载体和生物反应器经灭菌后，加入细胞生长液，接种制苗用细胞进行培养，待微载体上的细胞形成致密的单层，弃去细胞生长液，加入病毒维持液并接种猪瘟病毒，继续培养使病毒繁殖，其中，所述的微载体为Cytodex系列微载体，微载体的使用密度为2～25g/L；所述的生物反应器为搅拌式生物反应器，所述的生物反应器容积为14～150L，所述制苗用细胞经过14L～40L或14L～40L～150L逐级放大培养后，再将其置于40L或150L生物反应器中培养猪瘟病毒；所述猪瘟病毒的接种量为培养体积的1～2%；（2）接毒后18h，连续收获病毒培养液于‑15℃以下保存，合并病毒培养液加冻干保护剂制备猪瘟活疫苗。2、根据权利要求1所述的应用生物反应器工业化生产猪瘟活疫苗的方法，其特征在于：所述的生物反应器设定参数为：pH 6.5～7.8、温度33～37℃、溶氧30～80%、搅拌速度30～100rpm。3、根据权利要求1或2所述的应用生物反应器工业化生产猪瘟活疫苗的方法，其特征在于：所述的制苗用细胞为SK6细胞、ST细胞或PK‑15细胞。4、根据权利要求3所述的应用生物反应器工业化生产猪瘟活疫苗的方法，其特征在于：所述的细胞生长液为含体积浓度为8～10%小牛血清的DMEM或DMEM/F12，病毒维持液为含体积浓度为1～2%小牛血清的DMEM或DMEM/F12。5、根据权利要求3所述的应用生物反应器工业化生产猪瘟活疫苗的方法，其特征在于：所述生物反应器的培养采用批式、流加或灌注培养的方式，灌注的速率根据细胞的密度为每天0.5～5个工作体积。