基于逆转录环介导等温扩增技术检测猪萨佩罗病毒的方法

摘要

本发明涉及生物技术应用领域，提供了一种基于逆转录环介导等温扩增技术检测猪萨佩罗病毒的方法。本发明的方法为：筛选出猪萨佩罗病毒的保守序列区5'UTR并根据所述保守序列区设计4条引物；准备待测样品；配制反应液进行逆转录环介导等温扩增反应（RT-LAMP）；通过实时监测浊度仪输出的扩增曲线、荧光染料钙黄绿素的变色情况或者直接观察反应液的浊度变化鉴定反应结果。对于相关的检测部门或公司来说，本发明提供了一种廉价、快速、高效、高特异的检测方法。

主权项

一种基于逆转录环介导等温扩增技术检测猪萨佩罗病毒的方法，包含如下步骤：（1）设计4条引物所述引物包括外引物F3、外引物B3、内引物FIP和内引物BIP，所述引物序列如SEQ ID NO:1‑4所示；（2）制备待测样品采用商品化的RNA/DNA病毒核酸的提取试剂盒提取样品的RNA；（3）配制反应液采用商品化的RT‑LAMP试剂盒，根据说明书在反应管中加入反应缓冲液、酶的混合1液、所述4条引物、荧光染料钙黄绿素、所述RNA和水，总体积为25μL；（4）进行反应将配制好的所述反应管置于反应设备中，60～65℃恒温反应1h，83℃5min结束反应；（5）结果检测。