一种提取质粒的试剂和方法

摘要

本发明提供了一种提取质粒的试剂和方法，它包括细菌裂解液、内毒素去除颗粒溶液、内毒素去除液、质粒结合液、洗涤液和洗脱液等试剂。利用本发明所述试剂和方法提取质粒，其操作步骤简单，提取所消耗的时间短，能有效降低所提取质粒中的内毒素含量，所提取的质粒中内毒素的含量可降至0.1EU/μg以下，符合临床标准，获得的质粒DNA产量高，纯度好。

主权项

一种提取质粒DNA的试剂，其特征在于包括：细胞悬浮液、细胞裂解液、缓冲液、洗涤液1、洗涤液2、洗脱液、质粒结合液和内毒素去除颗粒溶液，其中：细胞悬浮液包括2mmol/L KH2PO4，10mmol/L Na2HPO4·12H2O，137mmol/L NaCl，2.7mmol/L KCl，1％Tween20，pH6.0‑8.0，使用前加入RNase A并混合均匀，4℃贮存，以超纯水为溶剂；细胞裂解液包括0.1‑2.5mol/L NaOH，质量体积百分比为0.05％‑1％的SDS，以超纯水为溶剂，室温密闭贮存；缓冲液包括0.1‑0.5mol/L(NH4)2HPO4·NH4H2PO4，0.5‑3mol/L KCl，pH3‑5，以超纯水为溶剂，室温密闭贮存；洗涤液1包括2‑8M GuHCl，200m mol/L Tris，2M EDTA，1.5mol/LNaCl，pH6.8‑7.0，以超纯水为溶剂，室温密闭贮存；洗涤液2包括50‑100％乙醇；洗脱液为dH2O；内毒素去除颗粒溶液包括10mg/ml能与内毒素特异性结合的复合颗粒，含有0.02％叠氮钠的20mM Tris‑HCl，pH为7.5；质粒结合液包括2‑8M GuHCl，10‑50mM HEPES，pH6.8‑8.2，以超纯水为溶剂。