母猪粪便孕激素的酶免测定法及检测母猪发情期的方法

摘要

本发明公开了一种母猪粪便孕激素的酶免测定法，步骤如下：1)样品收集：收集母猪粪便并称0.5g溶于20ml测定缓冲液中，离心，取上清，放于4℃待测；2)竞争ELISA测定样品中孕激素的含量：按照ELISA程序进行测定。本发明方法孕酮检测灵敏度达到0.2ng/ml或8ng/g；回收率95.78％；板内和板间变异系数分别为6.8％(n＝9)和11.23％(n＝8)；特异性：用50％置换法测得孕酮抗体与雌二醇、雌三醇、雌酮交叉反应率均小于0.01％，与睾酮交叉反应率为0.35％；稳定性好。本发明的方法所需要样品易收集，对动物基本无伤害，测得的结果可靠，能够代替测定动物血液方法监控动物一系列生殖活动。

主权项

一种母猪粪便孕激素的酶免测定法，其特征在于：步骤如下：1)样品收集：收集母猪粪便并称0.5g溶于20ml测定缓冲液中，离心，取上清，放于4℃待测；2)竞争ELISA测定样品中孕激素的含量：A)孕酮抗体包被：用含1∶10000抗体的包被缓冲液包被96孔酶标板，4℃冰箱放置24～48小时，待用；B)封闭：舍去内容物，封闭缓冲液封闭包被孔，每孔280μl，37℃放置2h；C)加待测样：取出包被板，舍去内容物，用洗涤液冲洗三次，3分钟/次；然后每孔加入待测样品100ul，再加1∶10000倍的孕酮酶标物工作液，37℃温育2小时以上；D)显色：用洗涤液冲洗三次，3分钟/次；加入底物液，200ul/孔，37℃避光，放置30分钟以上；E)终止：加入终止液，终止酶促反应；F)读取OD492nm值：用酶标仪在492nm波长处读取各孔的光密度值；G)OD值到浓度的换算：将标准曲线直线化：设样本孕酮浓度为x，结合率(E/E0：样品孔OD值/零标准孔OD值)为y，可得方程y＝a+blnx，利用回归方程即可求得待测样本的孕酮含量pg/100ul工作液。