主权项 |
一种小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖方法,其特征在于:该方法包括以下步骤:(1)外植体的选择与消毒:取小花蜘蛛抱蛋侧芽作为外植体,依次用2%洗洁精水溶液浸泡5‑15min、线状自来水冲洗10‑20min、添加了2‑3滴吐温‑20的100毫升0.1%升汞消毒8‑10min、无菌水冲洗3‑5次,最后用消毒滤纸吸去表面水分,得到外植体,其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水,(2)侧芽分化获得丛生芽快速繁殖培养:将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中,在培养温度为23‑26°C,光照强度1400‑2000lux,光照时间为10‑12小时/天的条件下培养30天,侧芽分化后获得丛生芽,其中MS培养基中含0.1‑0.4mg/L的KT、1.0‑2.0mg/L的6‑BA、1.0‑2.0mg/L的NAA、25‑30g/L蔗糖和3.8‑4.8g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,(3)丛生芽壮苗培养:将步骤(2)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中,在培养温度23‑26°C,光照强度1400‑2000lux,光照时间为10‑12小时/天的条件下培养40天得到健壮植株,其中MS壮苗培养基中含0.5‑1.5mg/L的6‑BA、0.2‑0.6mg/L的IAA、25‑30g/L蔗糖和3.8‑4.8g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,(4)健壮植株生根培养:将步骤(3)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中,在培养温度23‑26°C,光照强度1400‑2000lux,光照时间为10‑12小时/天的条件下培养40天得到带根的完整植株,其中MS生根培养基中含0.5‑1.5mg/L的IAA、1.0‑2.0mg/L的IBA、25‑30g/L蔗糖和3.8‑4.8g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,(5)炼苗与移栽:步骤(4)获得带根的完整植株后,在室温为25°C的室内打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗2‑4天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到通风良好且弱光沙土壤中,在沙土壤中生长一个半月后移栽大田。 |