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一种井冈霉素各组分的定性与定量检测方法，其步骤是： A、鉴别试验——定性：本鉴别试验与井冈霉素质量分数的测定同时进行，在相同的色谱操作条件下，井冈霉素试样溶液中各组分色谱峰的保留时间与井冈霉素标样溶液中井冈霉素各组分色谱峰的保留时间，其相对差值在1.5%以内，运用本方法检测井冈霉素标样，各组分保留时间分别为：VA14.967min、VM‑B3.616min、VM‑C16.115min、VM‑D8.555min、VM‑E28.902min VM‑F23.545min、VxA‑A7.553min;B、井冈霉素各组分质量分数的测定——定量：1）、试剂和溶液准备:试剂：新蒸二次蒸馏水, 甲醇,磷酸,无水磷酸氢二钾，浓硫酸；溶液：2.5mmol/L磷酸缓冲溶液:称取435.0mg 无水K2HPO4于1 000mL容量瓶中，加二次蒸馏水溶解，定容至1 000mL，摇匀，用磷酸调至pH=7.0备用，使用前用0.45μm的微孔滤膜过滤；0.05mol/L H2SO4溶液:取一支100 mL容量瓶，加入90mL二次蒸馏水，用移液管移取浓硫酸0.28mL缓慢加入其中，并用二次蒸馏水定容; 2）、仪器：高效液相色谱仪：具可变波长紫外检测器或二极管阵列检测器、自动进样器、柱温箱、四元泵、真空脱气机；色谱数据处理工作站；色谱柱：250mm×4.6mm不锈钢柱，YMC‑PACK ODS‑AQ，粒径5μm；溶剂过滤器：滤膜孔径0.45μm；针头过滤器：滤膜孔径0.22μm;3）、样品处理：井冈霉素标样溶液：称取井冈霉素标样110.0 mg至50mL容量瓶，二次蒸馏水溶解，加入2mL0.05mol/L H2SO4，二次蒸馏水定容，再分别移4、5、6mL至3个50mL容量瓶，二次蒸馏水定容，配成浓度梯度的标样溶液Ⅰ、标样溶液Ⅱ、标样溶液Ⅲ;标样溶液Ⅰ：井冈霉素A浓度约160.0µg/ml；标样溶液Ⅱ：井冈霉素A浓度约200.0µg/m l；标样溶液Ⅲ：井冈霉素A浓度约240.0µg/m l；试样溶液：分别称取适量井冈霉素试样2次于2支50mL容量瓶中，二次蒸馏水定容，量取2mL此溶液于100mL容量瓶，二次蒸馏水定容，0.22µm过滤器过滤后备用，配得试样溶液Ⅰ、试样溶液Ⅱ，其井冈霉素A浓度约200.0µg/m l;4）、色谱操作条件：流动相：2.5mmol/L磷酸缓冲液+甲醇=99+1； 流速：1.2mL/min； 柱温：30℃；检测波长：210nm； 进样体积：10μL；色谱柱：250mm×4.6mm不锈钢柱，YMC‑PACK ODS‑AQ，粒径5μm;5）、编制进样分析程序表:编制进样程序表：进样顺序为标样溶液Ⅰ、标样溶液Ⅱ、标样溶液Ⅲ、试样溶液Ⅰ、试样溶液Ⅱ，填写检测方法与样品信息;6）、测定：在上述色谱条件下，待仪器基线平稳后，点击化学工作站中的开始按扭，色谱仪自动进样器自动抽取标样溶液Ⅰ1 0µl于定量环中定量，定量后的标样溶液Ⅰ被流动相带入色谱柱进行分离，分离后的井冈霉素各组分依次进入检测器流通池，检测器对井冈霉素各组分采集数据并将色谱图及相关数据保存于电脑中，分析完毕的试样与流动相一起排入废液瓶中，这样完成标样溶液Ⅰ进样分析，接着按标样溶液Ⅱ、标样溶液Ⅲ、试样溶液Ⅰ、试样溶液Ⅱ的顺序依次进样分析;7）、数据分析：从色谱工作站中调出标样溶液Ⅰ、标样溶液Ⅱ、标样溶液Ⅲ的图谱，进行较准、绘制标准曲线； 标准曲线回归方程Area=k×Amt +b， R2须大于或等于0.999，调出试样溶液Ⅰ、试样溶液Ⅱ的图谱，将试样溶液中井冈霉素A的峰面积代入标准曲线回归方程计算出试样进样时井冈霉素A浓度CA ,则试样中井冈霉素A的质量分数XA(%)的计算式为: XA = CA ×50×100×100/2/m1式中：m1——试样的质量，单位为毫克；XA——井冈霉素A的质量分数，数值以%表示；CA——试样进样时井冈霉素A浓度，单位为微克/毫升；试样中井冈霉素A的质量分数为两次平行结果取平均值；从试样图谱中查出试样中井冈霉素A相关组分的峰面积AX，用加热减量法测出试样的固形物百分含量S，粉剂试样其干物质含量即为其固形物百分含量S，则试样的纯度P为：P= XA ×100/ S式中:XA为井冈霉素A的质量百分含量；S 为样品固形物质量百分含量；井冈霉素A相关组分的质量分数X(%)的计算式为：X=AX ×P /A A式中: A A为组分A峰面积,AX 为其它相关组分峰面积, P为试样纯度；各组分质量百分数为两次平行结果取平均值;8）、对井冈霉素产品中VA、VM‑B、VM‑C、V‑MD、VM‑E、VM‑F、VxA‑A七种组分进行定性并定量。 |
