液相色谱串联质谱分析尿液中苯和甲苯四种代谢产物的方法

摘要

本发明公开了一种液相色谱串联质谱分析尿液中苯和甲苯四种代谢产物的方法，该方法包括以下步骤：配制系列浓度的混合标样工作液，进行仪器分析，根据响应值与工作标样浓度之间存在的线性关系制成标准曲线；取待测尿样，加入含四种特征代谢产物同位素内标物混合工作标准品溶液；用固相萃取小柱吸附目标化合物，然后进行仪器分析；得到四种特征代谢产物的响应值；根据已知的系数f，求出尿样中四种特征代谢产物的浓度。所述的仪器分析是采用超高压液相色谱串联质谱法，色谱柱采用粒径<2μm的反相C18色谱柱。本发明方法简化了样品前处理步骤，缩短了样品仪器分析时间，定量准确性高。同时，本发明方法的仪器检出限和方法检出限非常低，提高了低浓度非职业暴露人群的检出率。

主权项

一种液相色谱串联质谱分析尿液中苯和甲苯四种代谢产物的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）选取反,反粘康酸、1,2‑苯二酚、苯巯基尿酸和N‑乙酰基卞基半胱氨酸作为苯和甲苯的特征代谢产物；配制含有上述四种特征代谢产物的单一标准品储备溶液、含有上述四种特征代谢产物同位素内标物的单一标准品储备溶液、以及含有上述四种特征代谢产物及其相应的同位素内标物的混合工作标准品溶液；（2）配制系列浓度的混合标样工作液；系列浓度的混合标样工作液中，内标的浓度保持不变，而目标化合物浓度成比例增长；将系列浓度的混合标样工作液注入色谱柱进行仪器分析，以（标样峰面积/内标样峰面积）为响应值；根据响应值与工作标样浓度之间存在的线性关系，即W=f×A，制成标准曲线；（3）取待测尿样，加入一定量的含四种特征代谢产物同位素内标物混合工作标准品溶液，使内标物的浓度介于标准曲线各浓度点的中部；调节待测样品的pH值为4.5，然后用甲醇、水、醋酸缓冲液分别活化后的固相萃取小柱吸附目标化合物；接着用醋酸缓冲液和水淋洗固相萃取小柱，除去杂质；真空抽干固相萃取小柱，然后用乙腈洗脱目标化合物；洗脱液用氮气吹干后，用少量甲醇溶液溶解，然后进行仪器分析；得到四种特征代谢产物的响应值；（4）根据已知的系数f，求出尿样中四种特征代谢产物的浓度；步骤（2）和（3）中所述的仪器分析是采用超高压液相色谱串联质谱法，色谱柱采用粒径<2μm的反相C18色谱柱。