主权项 |
一粒小麦成熟胚的组织培养方法,包括种子消毒、剥离种胚、愈伤组织诱导培养、分化培养及生根培养的步骤,其特征在于,所述愈伤组织诱导培养步骤中使用的培养基I为:在基础培养基中添加2,4‑二氯苯氧乙酸(2,4‑D)和/或6‑糖氨基嘌呤(KT)后制成的pH值为5.8‑6.0的培养基;所述分化培养步骤中使用的培养基II为:基础培养基+NAA 0.5‑1.0mg/L+6‑BA 1.0‑2.0mg/L+KT 1.0‑2.0mg/L+ZT 1.0‑2.0mg/L,pH值5.8‑6.0;所述基础培养基的配方为:NH4NO3 1600‑1670 mg/LKNO3 1800‑2000 mg/LMgSO4•7H2O 370‑380 mg/LKH2PO4 160‑180 mg/LCaCl2·2H2O 420‑440 mg/LKI 0.8‑0.9 mg/LH3BO3 5‑7 mg/LMnSO4·4H2O 20‑23 mg/LZnSO4·7H2O 8‑9mg/LNa2MoO4·2H2O 0.2‑0.25 mg/LCuSO4·5H2O 0.02‑0.025 mg/LCoCl2·6H2O 0.02‑0.025 mg/LFeSO4·7H2O 27‑28 mg/LNa2‑EDTA·2H2O 37‑38 mg/L肌醇 100‑105 mg/L甘氨酸 1‑2 mg/L盐酸硫胺素 0.05‑0.1 mg/L盐酸吡哆醇 0.4‑0.5 mg/L烟酸 0.4‑0.5 mg/L脯氨酸 500‑550 mg/L谷氨酰胺 500‑550 mg/L天冬酰胺 150‑200 mg/L水解酪蛋白 250‑300 mg/L蔗糖 55‑60 g/L植物凝胶 2.4‑2.5g/L以水配制;所述愈伤组织诱导培养步骤中使用的培养基I中2,4‑D与KT的添加比例为:2,4‑D 0.5‑1mg/L+KT 0‑0.05mg/L、2,4‑D 1‑2mg/L +KT 0‑0.05mg/L、2,4‑D 3‑4mg/L+KT 0‑0.05mg/L、2,4‑D 5‑6mg/L+KT 0‑0.05mg/L、2,4‑D 0.5‑1mg/L+KT 0.1‑0.15mg/L、2,4‑D 1‑2mg/L+KT 0.1‑0.15mg/L、2,4‑D 3‑4mg/L+KT 0.1‑0.15mg/L、2,4‑D 5‑6mg/L+KT 0.1‑0.15mg/L、2,4‑D 0.5‑1mg/L+KT 0.5‑0.6mg/L、2,4‑D 1‑2mg/L+KT 0.5‑0.6mg/L、2,4‑D 3‑4mg/L+KT 0.5‑0.6mg/L或2,4‑D 5‑6mg/L+KT 0.5‑0.6mg/L。 |