发明名称 一粒小麦成熟胚的组织培养方法
摘要 本发明提供一粒小麦成熟胚的组织培养方法,包括种子消毒、剥离种胚、愈伤组织诱导培养、分化培养及生根培养的步骤,其中愈伤组织诱导培养和分化培养步骤中使用的培养基分别为I和II。采用本发明方法,可显著促进一粒小麦成熟胚愈伤组织的形成和体细胞胚胎的发生,并使出愈率和分化率得到了显著改善,进一步提高植株再生率。
申请公布号 CN102668982B 申请公布日期 2013.06.26
申请号 CN201210161576.7 申请日期 2012.05.23
申请人 四川农业大学 发明人 郑有良;江千涛;魏育明;马建;刘亚西;王际睿
分类号 A01H4/00(2006.01)I 主分类号 A01H4/00(2006.01)I
代理机构 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 代理人 王朋飞;王加岭
主权项 一粒小麦成熟胚的组织培养方法,包括种子消毒、剥离种胚、愈伤组织诱导培养、分化培养及生根培养的步骤,其特征在于,所述愈伤组织诱导培养步骤中使用的培养基I为:在基础培养基中添加2,4‑二氯苯氧乙酸(2,4‑D)和/或6‑糖氨基嘌呤(KT)后制成的pH值为5.8‑6.0的培养基;所述分化培养步骤中使用的培养基II为:基础培养基+NAA 0.5‑1.0mg/L+6‑BA 1.0‑2.0mg/L+KT 1.0‑2.0mg/L+ZT 1.0‑2.0mg/L,pH值5.8‑6.0;所述基础培养基的配方为:NH4NO3             1600‑1670 mg/LKNO3              1800‑2000 mg/LMgSO4•7H2O      370‑380 mg/LKH2PO4                160‑180 mg/LCaCl2·2H2O      420‑440 mg/LKI                   0.8‑0.9 mg/LH3BO3                     5‑7 mg/LMnSO4·4H2O     20‑23 mg/LZnSO4·7H2O     8‑9mg/LNa2MoO4·2H2O   0.2‑0.25 mg/LCuSO4·5H2O     0.02‑0.025 mg/LCoCl2·6H2O      0.02‑0.025 mg/LFeSO4·7H2O      27‑28 mg/LNa2‑EDTA·2H2O  37‑38 mg/L肌醇                   100‑105 mg/L甘氨酸               1‑2 mg/L盐酸硫胺素         0.05‑0.1 mg/L盐酸吡哆醇         0.4‑0.5 mg/L烟酸                   0.4‑0.5 mg/L脯氨酸               500‑550 mg/L谷氨酰胺             500‑550 mg/L天冬酰胺             150‑200 mg/L水解酪蛋白         250‑300 mg/L蔗糖                   55‑60 g/L植物凝胶            2.4‑2.5g/L以水配制;所述愈伤组织诱导培养步骤中使用的培养基I中2,4‑D与KT的添加比例为:2,4‑D 0.5‑1mg/L+KT 0‑0.05mg/L、2,4‑D 1‑2mg/L +KT 0‑0.05mg/L、2,4‑D 3‑4mg/L+KT 0‑0.05mg/L、2,4‑D 5‑6mg/L+KT 0‑0.05mg/L、2,4‑D 0.5‑1mg/L+KT 0.1‑0.15mg/L、2,4‑D 1‑2mg/L+KT 0.1‑0.15mg/L、2,4‑D 3‑4mg/L+KT 0.1‑0.15mg/L、2,4‑D 5‑6mg/L+KT 0.1‑0.15mg/L、2,4‑D 0.5‑1mg/L+KT 0.5‑0.6mg/L、2,4‑D 1‑2mg/L+KT 0.5‑0.6mg/L、2,4‑D 3‑4mg/L+KT 0.5‑0.6mg/L或2,4‑D 5‑6mg/L+KT 0.5‑0.6mg/L。
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