一种周年大规模转化玉米的方法

摘要

本发明涉及一种周年大规模转化玉米的方法，属于农业生物技术和作物育种领域。其主要步骤包括：（1）在玉米生长季节分批相隔4-7天播种玉米受体材料；（2）授粉是自交或姊妹交，每天将授粉株数控制在大致相同的数量；（3）授粉后9-12天剥取幼胚进行根癌农杆菌介导法转化；（4）在无法获取幼胚的其它时间采用玉米种子萌发获得幼苗；（5）截取胚芽鞘节诱导愈伤组织并进行继代；（6）采用根癌农杆菌介导法转化愈伤组织。该方法有效克服了玉米转化缺乏受体材料、费用昂贵的缺点，易于实现周年规模化转化，从而获得大批转基因苗。

主权项

一种周年连续大规模转化玉米的方法，将幼胚和胚芽鞘节诱导愈伤组织为外植体的两种转化方法结合，主要包括以下步骤：1）在玉米生长季节分批播种玉米受体材料，间隔4‑7天播种一次；2）将上述步骤1）中播种的玉米在散粉前严格套袋，自交或姊妹交，每天将授粉株数控制在相同的数量；3）上述步骤2）中授粉的玉米在授粉后9‑13天，幼胚长至1.5‑2.0mm时，剥取幼胚进行根癌农杆菌介导的转化，将幼胚放入侵染液中侵染，置于共培养培养基上培养，移入恢复培养基上暗培养一周，随后移入筛选培养基上筛选2－4轮，在胚状体诱导培养基上诱导形成胚状体，转入到分化培养基上进行分化，得再生苗；4）在当年无法获得上述步骤3）的幼胚的时间段里，将灭菌的玉米种子置于发芽培养基中培养，萌发获得幼苗；5）将上述步骤4）中得到的幼苗切取胚芽鞘节，接种于愈伤组织诱导培养基上诱导愈伤组织；6）将上述步骤5）中得到的愈伤组织在愈伤组织诱导培养基上进行继代；7）用农杆菌介导法将外源基因转化上述步骤6）中的愈伤组织；8）将上述步骤7）中得到的愈伤组织置于胚状体诱导培养基中，得到玉米愈伤组织胚状体；9）将上述步骤8）中得到的愈伤组织胚状体置于再生培养基中，得到再生苗；10）将上述步骤3）和9）中得到的再生苗置于生根培养基中，获得具有3‑4条根的玉米再生植株。