巢式共扩增聚合酶链式反应试剂盒

摘要

本发明涉及一种操作简单、特异性高、特异性扩增效率超过2n倍的DNA体外扩增技术，即巢式共扩增聚合酶链式反应试剂盒，其英文名称是nest coamplific ation polymerase chainreaction，英文缩写是NCA-PCR；首先根据待扩增靶DNA序列合成一对特异的外侧引物和一对特殊的巢式引物，然后将内侧与外侧引物放入同一个含有耐热DNA聚合酶、dNTPs、模板DNA、镁离子、聚合酶链式反应缓冲液、超纯水等组成的扩增缓冲反应体系中，在热循环仪上进行高温、低温、中温的反复热循环，使内外侧引物同时引导新链合成，获得分别由内内、外外、内外侧引物界定的聚合酶链式反应产物，由于每一循环中合成的由外外、内外侧引物界定的聚合酶链式反应产物都可以作为内内引物附加的模板，使内内引物引导的聚合酶链式反应产物以每个热循环超过2倍的速度增加，经过n个循环，内内引物引导的聚合酶链式反应产物理论值即扩增为初始模板量的1/4(n2+3n)2n倍，大大提高了特异性扩增的效率。

主权项

一种扩增脆性X智力低下1号基因的5’非翻译区序列的引物组，其序列为：外侧上游引物P1：5’‑GGT TTC ACC TTC CGG TGG AGG‑3’外侧下游引物P2：5’‑CTC CAT CTT CTC TTC AGC CCT GC‑3’内侧上游引物P3：5’‑AAA CCC CTG CAG GGG CGT GCG GCA GCG‑3’内侧下游引物P4：5’‑AAA CGT CGG GCC CGA CGC CCG CGA GCT C‑3’。